参考文献： 17

致  谢 18

第1章 引言

脂肪酶是一种来源于微生物、细菌和动植物体内的一种重要的水解酶，能够催化甘油三酸酯和其他非水溶性酯类的水解、酯化、醇解等反应，在造纸、食品加工、生物染料生产等领域有着广泛的应用[1-3]，还有及其改性制剂等在许多领域也应用广泛。近些年，对脂肪酶结构，特别是对脂肪酶三维结构的研究，使得人们对脂肪酶作用的理解取得很大的进展。

在日常使用过程中，环境因素极易破坏酶的高级结构，从而导致失去活性。因此，各种材料载体被开发研究出来应用于脂肪酶的固定化，提高酶的催化活性，热稳定性以及周期寿命。现有被用于固定化酶的载体材料形式、材质多种多样，如介孔二氧化硅、氧化石墨烯、功能化纳米粒子、聚乳酸多孔微球、聚合物多孔薄膜、功能化纳米二氧化钛、聚合物水凝胶、交联壳聚糖微球、和离子交换树酯等[4-6]。最近，纳米纤维膜由于具有高的比表面积和较大的孔隙率作为酶的载体而引起了人们的研究兴趣，一方面，高的比表面积可以负载大量的酶分子；另一方面，传质阻力较低，使底物分子更容易与酶分子接触，加速酶促反应。来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766

随着人们对脂肪酶结构研究的深入，大量研究表明，脂肪酶与载体的相互作用对酶分子的三维构象和催化反应的微环境都有重要的影响。脂肪酶不同于其他水解酶，其具有“界面活化”的特点，即在油水两相界面上可显示良好的催化活性，该特性与其活性中心暴露构象有关。

通常，酶在膜表面的固定化可以通过物理吸附或化学偶联的方法实现。使用物理吸附法制备固定化酶时，两者之间仅通过简单物理作用连接，因此酶负载率较低，使用过程中易脱落，热稳定性也差；采用化学偶联法固定化酶，化学共价键作用使酶与载体牢固连接，并且可以大大提高酶的热稳定性[7]。因此我们设想，通过表面改性技术在POM/PLLA纤维表面引入可供酶分子化学偶联的官能团继而实现脂肪酶在POM/PLLA表面的固定化，利用POM/PLLA纤维表面的疏水特性，获得具有催化活性高和热稳定性良好的固定化脂肪酶。

基于以上考虑，我们对POM/PLLA纤维进行氨基化改性，并通过共价偶联方法在POM/PLLA纤维表面固定脂肪酶，比较酶固定化前后POM/PLLA的尺寸、结构的变化，并对固定化酶的活性、酶催化动力学以及热力学、热稳定性、重复使用性等进行系统的研究。

第2章 实验部分

2。1  原料与试剂

猪胰脂肪酶 (L3126, type Ⅱ，EC)：Sigma 化学试剂公司、牛血清蛋白(BSA)：上海博奥生物试剂有限公司产品；碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)：分析纯，美国Aldrich产品；己二胺、异丙醇等购自国药集团化学试剂有限公司，分析纯；实验所用水为Milli-Q高纯水。

考马斯亮蓝G-250溶液：取50mL 95%乙醇溶解100mg考马斯亮蓝G-250，另加85%(w/v) H3PO4 100mL，加蒸馏水稀释至1000mL，置棕色瓶过夜，用二层滤纸过滤备用。

橄榄油乳化液：取2。0g聚乙烯醇溶于98mL去离子水中并加热搅拌，使其充分溶解，并用纱布过滤得到浓度为2wt%的PVA溶液，并与橄榄油按体积比75:25(V/V)的比例混合，经超声乳化(30%)获得乳白色液体，将其放置于4℃冰箱中备用。

NaOH标准溶液：配置浓度约为50mM的NaOH溶液，精确称取邻苯二甲酸氢钾配置浓度为50mM的溶液，并用该溶液标定NaOH溶液，得到已知浓度的NaOH标准溶液。

2。2  POM/PLLA-NH2的制备