摘要：哌啶酮是许多药物，尤其是抗心律失常药与抗肿瘤药的基本结构。本实验室在前期工作中运用基因克隆技术成功构建了14株表达重组醇脱氢酶的基因工程菌，本课题拟对其做活性测定，筛选出能高效催化N-boc-哌啶酮不对称还原生成(S)-N-boc-3-羟基哌啶的目标催化剂。主要的研究方法是先将构建好的重组质粒转化进入表达宿主E。 coli BL21( DE3)中，利用菌落PCR的方法鉴定，挑选阳性克隆子。对阳性克隆子进行诱导、表达，并进行活性筛选。在第一次实验过程中未能筛选出合适催化剂，提高诱导温度，重新筛选，最终成功筛选出一株能够不对称合成(S)-N-boc-3-羟基哌啶的醇脱氢酶。77547

毕业论文关键词：N-boc-哌啶酮，不对称还原，酶的筛选

The Screening of Recombinant Alcohol Dehydrogenase and its Use in the Synthesis of (S)-N-Boc-Piperidinol

Abstract: Piperidone is a fundamental structure of many drugs, especially of anti-arrhythmic drugs and antineoplastic drugs。The lab successfully cultivated 14 recombinant alcohol dehydrogenase(RAD) which were expressed in E。coli in previous work。 This article is to screen highly-selective catalysts that can asymmetrically reduce N-boc-piperidone in the synthesis of (S)-N-Boc-Piperidinol through the assay of enzyme activity。 The main procedure of the experiment is to transform DNA into E。 coli BL21(DE3) and decide whether the transformation is complete by agarose gel electrophoresis。 Incubate for a while and then Induce with IPTG。 After the continous cell disruption, I use ultraviolet spectroscopy as a way of quantitative analysis and gas chromatography and gel electrophoresis as a way of qualitative analysis。 If the aim were screened, I would optimize the conditon of induction。 But, I was not able to find the enzyme,and as a result, I changed the temperature of induction and found one successfully。

Key words: N-boc-piperidone, asymmetric reduction, the screening of enzyme 

目  录

1 研究背景 ·· 1

 1。1 基因工程 ·· 1

  1。1。1 基因工程的定义 ·· 1

  1。1。2 基因工程的流程 ·· 1

  1。1。3 基因克隆的应用与展望 ·· 1

 1。2 哌啶酮的生物催化  2

  1。2。1 手性药物的生物催化 · 2

  1。2。2 哌啶酮的不对称还原 · 2

2 实验流程 ·· 4

3 试验方法和材料 ·· 5

 3。1 菌种  5

 3。2 培养基的制备 · 5

  3。2。1 液体培养基制备 ·· 5

  3。2。2 平板培养基制备 ·· 5

  3。2。1 主要试剂 ·· 5

  3。2。2 实验仪器 ·· 5

 3。3 转化  6

  3。3。1 实验原理 ·· 6

  3。3。2 具体步骤 ·· 6

  3。3。1 主要试剂 ·· 6

  3。3。2 实验仪器 ·· 7

 3。4 聚合酶链式反应 ·· 7

  3。4。1 实验原理 ·· 7

  3。4。2 具体步骤 ·· 7

  3。4。1 主要试剂 ·· 8

  3。4。2 实验仪器 ·· 8

 3。5 凝胶电泳 ·· 8

  3。5。1 实验原理 ·· 8

  3。5。2 具体步骤 ·· 9

  3。5。1 主要试剂 ·· 9

  3。5。2 实验仪器 ·· 9

 3。6 诱导表达 ·· 10

  3。6。1 实验原理 ·· 10