4。2实验方法 14

4。2。1 蛋白质大量诱导 14

4。2。2 蛋白质Ni-NTA Agarose亲和层析纯化 15

4。2。3 蛋白质分子筛层析纯化 15

4。3实验结果 16

5 蛋白质活性测定 22

5。1实验仪器和材料 22

5。2实验方法 22

5。3实验结果 22

结  论 25

致  谢 26

参 考 文 献 27

1  引言

帕金森病是一种常见的神经退行性疾病，目前全球有超过400万PD患者。且其多见于老年人群，55岁以上人群患病率达1%，75岁以上人群患病率达2。5%，因为我国的老龄化状况较为严重，每年都有数万的新患者加入这个群体，现今人数已超过200万【1】。

由于至今尚未有彻底治愈PD的有效治疗手段，PD严重危害着中老年患者的身体与精神健康，患者将逐步失去生活自理能力，同时饱受精神上的折磨，给家庭和社会带来了沉重的负担。

而LRRK2基因上的致病突变是PD的常见病因【2】，通过对LRRK2蛋白质的关键功能域Roc结构域进行研究，将有助于深入了解LRRK2蛋白质的生理学功能及其突变型的致病机理，从而探求PD的有效疗法。论文网

我们构建LRRK2蛋白质Roc结构域的重组蛋白表达载体，用定点突变技术引入待研究的突变位点，诱导表达出重组蛋白质，运用蛋白分离纯化技术以得到足量的高质量蛋白，从而为后续研究提供准备。

1。1  帕金森病（PD）

  帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）是一种最常见的神经退行性疾病，其患者脑部最典型的病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元的病变性死亡，在黑质残存神经元胞质内出现路易小体【3】【4】。然而尽管早在19世纪初便有人对PD进行了详细描述，时至今日其致病机理和确切的病因仍然有待探究。人们发现，PD的发病率随着年龄增加而变大，部分PD病例表现出家族遗传的特征。经总结发现，遗传因素、年龄老化、环境影响、氧化应激等因素均可能是多巴胺神经元的病变性死亡的诱因。总而言之，PD可能是多个基因和环境因素相互作用的结果，其病变机理及其复杂。

由于患者的多巴胺能神经元细胞死亡，PD患者会表现出静止性震颤、肌强直、动作缓慢及姿势步态障碍等临床症状。除了运动障碍表现，近些年来，研究者发现PD患者还表现出智能减退、情感障碍等非运动症状，而后者对患者的身心健康会具有更大的影响。

PD的危害不仅在于其危害之大，还在于其影响之广。根据国际统计数据，中国目前PD患者人数已有200多万人，约占全球的50%。其中75岁以上的老人患病率达到了10%。虽然PD多发于老年人群——患者的平均发病年龄约为60余岁，但如今青年患者的比例也呈现上升趋势，部分地区门诊病历中青年患者以占10%左右。

PD是一种慢性进展性疾病，具有高度异质性，不同病人疾病进展速度不同，目前尚没有完全治愈手段。通过药物治疗或辅以手术治疗仅可控制、延缓PD发生和进展，并且只有早期发现临床前患者，并采取有效的预防措施才能阻止多巴胺神经元的变性死亡，这也是现今PD研究领域的热点之一。