摘 要：固定化酶技术由于其自身的稳定性好、可连续操作等优点，被广泛使用，乙酰胆碱酯酶（AChE）是固定化酶技术的一种重要酶。因此，本课题对以NH2-SBA-15固定化的AChE进行研究，通过系统地考察了磷酸盐缓冲溶液的pH值、浓度、固定化温度、固定化时间、以及戊二醛交联浓度对AChE固定化的影响，确定每一种影响因素的最适条件。通过酶活的测定，最后确定下来的最适条件为：pH 8。0、温度20oC、时间45min、PBS浓度0。3M、戊二醛浓度10mM。固定化酶性质的研究中：该固定化酶在pH 8。0下具有最佳的pH稳定性，在30oC和40oC时具有较高的温度稳定性。同时，对该酶也进行了分子模拟，得出的结果是AChE和其配体小分子的结合位点在分子表面，以及对接的打分情况也都较符合要求。81430

毕业论文关键词：乙酰胆碱酯酶；固定化；介孔分子筛；酶活测定；分子模拟

Molecular simulation and immobilization of acetylcholinesterase（NH2-SBA-15）

Abstract: Immobilized enzyme technology is widely used because of its good stability, continuous operation and so on。 Acetylcholinesterase (AChE) is an important enzyme in this technology。 Therefore, this topic studies the AChE which is immobilized by NH2-SBA-15 to determine the optimal conditions for each of the influencing factors。 Through the systematic study of the phosphate buffer solution’s pH value, AChE concentration, immobilization temperature, immobilization time, and glutaraldehyde concentration on the effect of AChE immobilization。 According to the result of enzyme activity, the optimum conditions are determined as follows: 0。3 M pH 8。0 of PBS, 20oC, 45 min, and 10 mM glutaraldehyde。 In the study on the properties of immobilized enzyme: the optimum pH is 8。0, and the optimum temperature is 30oC and 40oC。 At the same time, the enzyme is also simulated by molecular simulation。 As a result, the binding site of AChE and its ligand is on the molecular surface, and docking scorings are also meet the requirements。

Key words：Acetylcholinesterase；immobilization；mesoporous molecular sieve；enzyme activity assay；molecular simulation

目录

1研究背景 1

1。1 食品中的农药污染 1

1。2 乙酰胆碱酯酶 2

1。2。1 乙酰胆碱酯酶简介 2

1。2。2 乙酰胆碱酯酶的应用 2

1。3 固定化酶 2

1。3。1 固定化酶简介 2

1。3。2 固定化酶的制备方法 3

1。3。3 固定化酶的应用 3

1。3。4 固定化酶的发展前景 4

1。4 固定化酶载体 4

1。4。1 固定化酶载体的分类 4

1。4。2 NH2-SBA-15简介 5

1。5 计算机分子模拟技术 6

1。6  本课题的研究 6

1。6。1 研究意义 6

1。6。2 研究思路 7

2实验与设计的技术流程 8

2。1 乙酰胆碱酯酶固定化研究的技术流程 8

2。2 乙酰胆碱酯酶分子模拟的技术流程 8

3实验材料和方法 9

3。1 实验材料