1．2 基因枪转化法

基因枪法又称微弹轰击法，是1983年美国康奈尔大学Sanford等[３６]首先发明的。基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是将外源DNA包被在金属颗粒(金粒或钨粒)上，通过动力系统对植物组织进行轰击，将外源DNA带入细胞内，并整合到染色体上，从而实现基因的稳定转化”[１２] 。

1988年McCabe等 [３７]首次用基因枪转化大豆未成熟胚的生长点，获得转基因大豆植株但均为嵌合体。Yang等[３８]利用基因枪转化获得转基因植株，观察到R1代植株CaMV35S启动子的特异表达特点。Stewart等[３９]通过基因枪法将合成的Bt(CtylA C．)基因轰击入悬浮培养的球形体细胞胚，获得3个转基因株系。薛仁镐[４０]以萌动1天的半片种子为靶组织，利用GUS瞬时表达研究了影响基因枪转化效率的几个因素。结果发现，靶组织培养2天，轰击2或3次，轰击距离为9cm时，GUS瞬时表达效率最高，而靶组织不同放置方式对转化效率无明显的差异。叶美等[４１]以“荷豆12”成熟种子胚尖为材料，对基因枪法转化体系进行了优化。王贵荣等[４２]用基因枪转化大豆离体生长点，获得到T２代植株及其纯合阳性转化子，并显著提高了转化效率[４3]。

基因枪法无宿主限制、靶受体类型广泛，可控度高，操作简便、快速，是对农杆菌不敏感的物种和基因型转化的常规方法，也是研究瞬时表达的常规技术。

1.3 花粉管通道法

　　花粉管通道法将含目的基因的DNA放到授粉后不久经切割的花柱上，DNA沿着花粉管到达胚珠，并进一步整合到胚珠的基因组中，当携带外源基因的受精卵发育成植株时，即获得了转基因植物，这就是花粉管通道介导的转化。利用花粉管通道法导入外源基因的方法有子房和胚囊微注射法、柱头滴加法、花粉粒携带法和生殖细胞浸泡法等。花粉管通道法首次用于转化水稻，后来也用于转化其他作物。雷勃钧等[44-45]最早在大豆上应用花粉管通道技术进行转基因研究，此后我国许多学者相继开展了这方面的研究，并育成了抗病丰产品系花粉管通道法虽然简便易行，但存在需要育种工作者摸索具体的外源DNA导入时间、方法及后代选择等问题。

１.４电击和PEＧ／电击方法

电击和PEG／电击方法遗传转化的基本原理是在电击或PEG／电击处理下，细胞膜透性的可逆变化使得溶液中的大分子物质(如DNA)进入细胞并改变细胞的遗传物质构成。关于电击或PEG／电击法遗传转化大豆，近些年来也取得一些成果。Lin等(1987)[46] 通过电击并加PEG将外源基因Pnos－npt I和3－cat共建于同一质粒上，导人培养的大豆原生质体并获得表达。Chtristou等(1987)[47] 通过电击已使许多主栽大豆品种的原生质体得到稳定转化，并从转化的愈伤组织形成根。用同一方法，Chtristou和Swain通过对连锁和非连锁基因电击共转化频率的研究以探讨多基因的转化。Dhir等(1992)[48]旧电击大豆的原生质体获得了转基因植株。应该指出，应用电击法，受体常用原生质体，而原生质体的再生尚较困难。所以该法目前也有较强的基因型依赖性。

1.4超声波辅助农杆菌转化方法

　　超声波辅助农杆菌转化方法(sonicstion assisted Agrobacterium-mediated transformation)是近年发展起来的一种遗传转化方法。超声波基因转化的基本原理是利用低声强脉冲超声波的物理作用，击穿细胞膜，使外源DNA进入细胞。在进行农杆菌转化时用超声波处理外植体组织，使其产生小的通道(伤口)，有利于农杆菌进入植物细胞内，大大提高转化效率。用超声波处理材料的时间和强度，不宜过大。Trick等[49]用扫描电镜及光学显微镜观察发现，超声波处理后使外植体表面及近表面产生大量的细小贯穿通道，农杆菌易于与植物细胞接触，从而促进转化过程。Santarem等[50]以未成熟子叶为外植体利用超声波辅助进行农杆菌转化，获得了GUS基因的高效表达。Meurer等[51]超声波辅助农杆菌转化未成熟子叶和子叶节，试验结果并没有得到稳定的转化。至今，有关于超声波辅助农杆菌转化的方法报道甚少。 大豆外源基因遗传转化文献综述和参考文献(2):http://www.youerw.com/wenxian/lunwen_45835.html