ELISA实验（即enzyme linked immunosorbent assay)，是指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。这一方法最早是由恩瓦尔和帕尔曼于1971年提出，并应用于白介素（IgG）定量测定，并因此使于1966年开始于用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。81043

1 ELISA实验的基本原理

1）包被一抗：使抗原或抗体结合到某种固相载体的表面，同时需要保持其免疫活性。

2）结合二抗：使抗原或抗体与某种酶（视实验而定）连接成酶标抗原或抗体，注意，这种酶标抗原或抗体既需要保留其免疫活性，又需要保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按照不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

3）洗板：即用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成适量的比例。

4）加入HRP及显色：加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而可以极大地增加测定方法的敏感度[1]。

2 ELISA实验的常见类型有：

1）双抗夹心法测抗原：适合检测各种大分子蛋白质类型的抗原。用于包被固相载体和酶结合物来建立。

2）双抗夹心法测抗体：受测样本无需稀释，因而敏感度高于间接法，通常通过特异性抗原来进行包被及特异性酶结合物的制备。常用于乙肝表面抗原的检测。此法中，酶标抗原的制备方式是关键。

3）间接法测抗体：通常用于传染病的检测，其优点为可通过替换包被抗原来达到利用同一酶标抗抗体建立检测相对应抗体的方法。

4）竞争法测抗体：通常于两种情况下使用，第一、抗原材料中存在不易去除的干扰物质，第二、抗原材料不易得到足量的纯化抗原时。这两种情况下可用本法测定特异性抗体。

5）竞争法测抗原：当小分子抗原或半抗原缺乏可做双抗夹心法的两个点位时使用，其原理为标准抗原与适量酶标抗原进行与固相抗原结合量的竞争。若标准抗原含量越多，则美标抗原与固相抗原结合量越少，因而显色也越浅。多用于小分子激素及药物的ELISA测定。

6）捕获包被法测抗体：测试对象多为免疫球蛋白（IgM），以此来达到传染病的检测。固相通过采用人IgM抗体包被，以达到捕获血清标本中的IgM的目的。通常用于人体病毒感染的早期检测。

3 ELISA测试试剂准备

1）固相载体的准备：一般选择聚苯乙烯以及聚氯乙烯，两者各有侧重。由于固相载体需考虑其对于蛋白质的吸附性及空白值的影响，因而选取上述两种抗原抗体、蛋白吸附之后可保留其原来的免疫活性的材料。相对于聚苯乙烯来说，聚氯乙烯的蛋白吸附性更好，但相对来说，其空白值一般也偏高。对于一个良好的ELISA板来说，需要具有以下特点，良好的吸附性，较低的空白值，较高的透明度。并且板与板间，板与孔间，孔与孔间的性能相近。

2）包被：即将抗原抗体固定在板上的过程。

 蛋白质通过固相吸附作用与聚苯（氯）乙烯结合，是靠蛋白质疏水基团与聚苯（氯）乙烯上的疏水键间的相互中作用来达到的。这种吸附为特异性吸附，主要受到蛋白质的等电点，浓度及分子量的影响，故而含有更多疏水基团的大分子蛋白质相较于小分子蛋白质更容易吸附在板上，即更容易包被； ELISA实验国内外研究现状:http://www.youerw.com/yanjiu/lunwen_94427.html