DNJ 的提取桑中 DNJ 的提取方法主要有蒸馏水提取法、盐酸提取法、去离子水煎煮法、乙 醇提取法及微波辅助提取法等。

2  分离纯化

在分离纯化技术上，多数采用阳离子交换树脂法，反向色谱纯化技术也有少量 研究报道。

3 DNJ 的检测

3。1 分光光度法 分光光度法主要依据有色溶液对光的有选择的吸收。不同的物质由于其分子结构不同，对光线的吸收能力也不同，其吸收光谱曲线也有其特殊形状。学者们发现 DNJ 的紫外吸收光谱在 284 nm 和 356nm 处都有吸收峰[21]，在 284 nm 处峰值高而尖，而 356nm 处低且宽，而且 356 nm 接近可见光，为了保证检测的灵敏 度，选取 DNJ 的最大吸收波长为 284 nm[22]。使用分光光度法测定 DNJ 的含量优势在于操作简单、成本小、重复利用性好等， 它的应用相当广泛，但是，该方法的精确度不高，造成实验误差大进而不适用于精 确测量。82343

3。2 柱前衍生化-高效液相色谱法

FMOC-Cl 柱前衍生化 HPLC 测定。FMOC-Cl，全称为芴甲氧羰酰氯，是一种较 新的氨基酸衍生化试剂，主要适用于伯胺和仲胺的衍生化，反应后的衍生物具有稳 定的荧光强度。DNJ 分子中具有仲胺结构，在一定的条件下可与 FMOC—CI 反应生 成 DNJ—FMOC 络合物，该物质是一种荧光物质，可用检测器检测其含量。由于 FMOC—CI 本身具有强烈的荧光，为避免干扰，一般在衍生化反应后加入一定量的 甘氨酸以除去多余的荧光试剂。

采用柱前衍生化．高效液相一荧光检测法测定了桑叶中的 DNJ 含量[23]，主要方 法为：

1。用移液器取 100 μL 预处理后的待测物于 2 mL 离心管；论文网

2。加入 100 μL0。5 mol/L 的硼酸盐溶液；

3。加入 200 μL5mmol/LFMOC-CI（溶解于乙腈中）混匀后 25℃反应 20min；

4。加入 100μL 1mol/L 甘氨酸（中和多余的 FMOC-Cl），混匀 25℃反应 5min；

5。加入 100μL 1％醋酸，然后加入 400μL 超纯水；

6。高速离心机离心 5min（8000r/min）；

7。离心后上清液 0。45μm 微孔滤膜过滤后收集进行高效液相色谱测定。 也可以将衍生化反应的条件改为 pH 为 7。0 的硼酸盐缓冲液[24]。Kim 等也采用类

似的方法测出了桑树中的 DNJ 含量。

近年来，关于 DNJ 含量测定的有关文献报道中多采用荧光检测器来测定 DNJ 的 含量，虽然灵敏度较高，可是检测器价格昂贵。采用紫外检测法虽然灵敏度有所降 低，但可以通过优化实验条件来提高结果的准确性，而且，一般的高效液相色谱仪 均配备紫外检测器，故采用紫外检测更具实用性[25,26,27,28]  。

用 FMOC-C1 柱前衍生化法测定 DNJ 含量时需要注意：DNJ．FMOC 络合物在 室温非酸性条件下不稳定；缓冲液 pH 值影响较大，pH8。5 时维持衍生化产物的稳定 性较好；FMOC-CI 试剂现用现配；衍生化反应体系的反应产物需在 12 h 内测定完毕。