3)加InducerⅡ:52 h后加Insulin 10 ug/mL的10%FBS1%双抗的高糖DMEM培养液再培养;

4)加Inducer Ⅲ:每隔48 h后换培养液一次，待诱导分化约8～12天3T3-L1细胞90%多呈成熟脂肪细胞表型，可用于实验。

2。2。1  MTT法测定XXC-W对3T3-L1的细胞毒性

用MTT法筛选出对3T3-L1细胞无毒性的豨莶草水提物浓度。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

实验步骤： 

1）接种细胞：用含10％新生牛血清的培养液配成细胞悬液，通过血球计数板计数，以每孔10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200 ul。 

2）加样：接种24 h后加入不同浓度的豨莶草水提物。

3）呈色：44 h后每孔加入50μL已配制好的2μg/μL的MTT溶液，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加150 ul DMSO，振荡10 min，使结晶物充分融解。 

4）比色：选择490 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值，记录结果数据，按公式计算细胞存活率。

2。2。2  油红O染色法测定XXC-W对成熟3T3-L1脂肪细胞增殖的抑制作用文献综述

油红 O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大，使组织内的脂滴呈橘红色。用于检测成熟的3T3-L1脂肪细胞中脂肪增殖的情况。

具体流程如下：

1）配制：将油红染液与纯净水稀释液按5:2稀释，过滤，滤液两小时内用完。

2）清洗：吸除培养基后用PBS清洗两遍。