帕金森病最突出的病理性改变是中脑的黑质多巴胺（dopamine, DA）能神经元变性死亡、纹状体多巴胺含量显著减少、及黑质残存神经元胞质内出现了嗜酸性包涵体，即路易小体（Lewy body）。当出现临床症状时，黑质多巴胺能神经元死亡至少在50%以上，纹状体多巴胺含量减少在80%以上。但自1871首次报道PD 以来，关于PD发生机制仍不清楚，现有证据显示，该病的发生可能与神经炎症密切相关。当各种原因引起脑内炎症，进而通过炎症途径，导致中脑多巴胺神经元变性死亡，引起PD的发生，但其发生的详细机制尚未阐明[4][5]。因此有必要对该病的发病机制进行深入研究。

5-脂氧酶（5-lipoxygenase，5-LOX）属于脂质过氧化物酶家族，它是催化花生四稀酸生成炎性介质白三烯类物质（leukotrienes, LTs）的关键酶，参与了机体内多种炎症疾病的发生发展，如哮喘、动脉粥样硬化、溃疡性结肠炎等[6-7]。近年来的研究发现，5-LOX在人和动物的大脑内广泛分布，并参与了神经系统疾病如脑缺血、老年痴呆等的发生。在大鼠全脑缺血和局灶性脑缺血损失模型中，5-LOX蛋白和MRNA表达明显增加，应用5-LOX抑制剂咖啡酸等可显著降低缺血引起的损伤[8]此外，研究表明，5-LOX在慢性铝过负荷制作的海马神经元退变大鼠模型中mRNA和蛋白质水平明显增加。在转基因老年痴呆小鼠中，5-LOX参与了疾病的发生。应用5-LOX抑制剂齐留通，可改善小鼠的记忆功能，显著减少Aβ沉积和Tau蛋白磷酸化，发挥保护作用[9]。我们实验室的前期研究发现，5-LOX参与了PD的发生。在鱼藤酮处理的PC12细胞损伤模型中，5-LOX发生了核膜移位（即5-LOX发生激活）。5-LOX抑制剂齐留通可浓度依赖的抑制5-LOX的核膜移位，减轻鱼藤酮引起的PC12细胞活性降低。此外，齐留通预处理BV2细胞，可显著减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的损伤。但是，在PD动物模型中，5-LOX的作用及变化情况，仍不清楚，本实验拟在动物PD模型中，观察5-LOX在脑内的定位及变化情况。

对组织内蛋白质的检测，常用的方法有免疫组织化学法、western blot等。免疫组织化学法即免疫组织化学，它利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类抗原物质，最后利用化学方法染色，使某一抗原在显微镜下可见，并对其在组织中的位置进行定位。免疫荧光技术又称免疫抗体技术，它是将荧光素标记在相应的抗原或抗体上，利用抗原抗体反应，检测相应目标蛋白的方法，主要用于研究特异性蛋白抗原在细胞内分布的方法。Western blot又称免疫印迹技术，是一种蛋白质转移技术，即将经过SDS-聚丙烯酰胺电源分离后的蛋白质在转移至硝酸纤维纸或尼龙膜上，当抗体与膜上的蛋白条带结合后，即可用酶联的二抗或生物素标记或胶体金标记的二抗等进行作用，最后以发色底物显色。该方法可以定性、半定量研究组织蛋白的表达变化，具有敏感度高、特异性强的优点，但是该方法操作步骤繁多，操作不宜掌握，影响结果的因素较多等缺点，另外该方法不能精确定位目标蛋白在组织中的表达[10]。相对于western blot，免疫组化和免疫荧光技术具有操作简单方便，结果特异性强，敏感性高等优点，还可在组织样本中准确定位目标蛋白的表达特点（如细胞表达情况、细胞亚定位等）[11]。因此，本实验拟采用免疫组化和免疫荧光技术，对PD动物模型脑内5-LOX的变化及定位进行研究，为进一步阐明5-LOX在PD中的作用奠定基础。来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 免疫组化技术在PD脑内炎症研究中的应用(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_195222.html