橘皮素（C26） 33.56;83.9;134.25;167.81;268.5;335.63;537;671.25;1074;1342.5;2148;2685

内标液 使用甲醇配制双内标混合液，其中 IS1 浓度为:11.25g/ml;IS2 浓度为:2.5g/ml

1．4 对建立的生物样品中中药方 LC-MS/MS 测定方法的考证

1．4．1 血浆样品的处理及方法特异性的考证

取 80l 大鼠血浆，加内标 10l，混匀后，再加入 510ul 甲醇，振荡 5min，5000 rpm， 离心 5min，取上清液 0.5ml，在 450C 离心浓缩挥干装置中挥干，用 80l 50%ACN 溶 解残渣，20，000 rpm，离心 10min，2l 进样，用样品与内标峰面积比值进行定量分析。 其中 C4、C7、C12、C13、C16 与内标 1 的峰面积相比，C23、C25、C26、C34 与内标2 的峰面积相比。 进行相应的“血浆样品处理”，通过比较空白大鼠血浆样品，添加标准品和 IS 的血浆样品和口服施用提取物 30 分钟后的血浆样品的色谱图来研究特异性和选择性。

1．4．2 标准曲线的制备及最低检测浓度测定

取 72μl 大鼠空白血浆，加入 8l 不同浓度的标准品工作液后，配制成表 2-1 中对应 浓度，按相应的“血浆样品处理”项处理，利用标准品峰面积与内标峰面积比值 y 对 标准品加入量(浓度 C)作权重线性回归(权重系数 w=1/C），得相应的回归方程。

表 2-1

名称 浓度 ng/ml

C4 77.656; 124.25; 155.313; 310.625; 621.25; 1242.5

C7 33.25; 41.563; 83.125; 133; 166.25; 266; 665; 1064; 1330; 2128

C12 30.156; 60.313; 96.5; 120.625; 193; 241.25; 386; 482.5; 772; 965; 1544

C13 25.625; 32.031; 64.063; 102.5; 128.125; 205; 256.25; 512.5; 820; 1640

C16 50; 150; 250; 500; 1000; 2000; 2500

C23 5.063; 10.125; 20.25; 25.313; 50.625; 81; 162; 324; 405; 648; 810; 1296; 1620

C34 3.859; 7.719; 15.438; 19.297; 30.875; 38.594; 77.188; 123.5; 247; 308.75; 494; 617.5; 988; 1976;

2470

C25 3.212; 4.016; 8.031; 12.85; 16.06; 25.7; 32.13; 64.25; 102.8; 128.5; 205.6; 257

C26 3.356; 8.39; 13.425; 16.781; 26.85; 33.563; 53.7;67.125; 107.4; 134.25; 214.8; 268.5

1．4．3 精密度与准确度考察

取大鼠空白血浆 72l，加 8l 混标工作液，配制成 QC 样品浓度如表 2-2 所示，同 “血浆样品处理”项处理。用各成分的积峰面积与相应内标的积峰面积比值代入对应成 分的线性方程，计算得到相应的浓度，考察批内和批间变异情况。

表 2-2

C4 C7 C12; C13 C16 C23 C34 C25 C26

最低定量限 77.656 33.25 30.156 25.625 50 5.063 3.859 3.212 3.356

低浓度 柴胡舒肝散药物代谢动力学的研究(4):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_205294.html