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重组醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶偶联表达工程菌培养条件的优化(4)

时间:2021-08-17 20:17来源:毕业论文
醇脱氢酶催化还原反应方程 微生物细胞中含有的氧化还原酶一般都是由一系列拥有相同生理功能的不同酶组成的混合酶,与底物反应时这些混合酶当中不

 醇脱氢酶催化还原反应方程

微生物细胞中含有的氧化还原酶一般都是由一系列拥有相同生理功能的不同酶组成的混合酶,与底物反应时这些混合酶当中不同的酶可以将其还原成不同立体构型的产物。当这些酶都发挥了等效催化的作用时,则生成的产物的构型就不够唯一,就说明这种混合酶的对底物还原的专一性不够好。

利用微生物法还原羰基化合物的整个还原全过程都是需要辅酶的参加,才能进行还原或氧化而且必须要符合化学当量中的,并且要可逆地催化反应物,才能把酮(或者醛)基还原为醇。当前,NADH(辅酶Ⅰ)和NADPH(辅酶Ⅱ)基本涵盖了氧化还原反应中所需要的辅酶的所有类型。但是能参与酶催化的氧化还原反应的辅酶多半都是高成本高消耗的,为了能够循环利用这种高成本的辅酶,需要我们投入更多的成本和金钱。对比之下,使用全细胞代替进行氧化还原反应就显得格外省力。微生物细胞含有大量的能与不同底物结合的脱氢酶、和所有必需的辅酶,更重要的是,在微生物细胞中可以自动完成各种酶类的循环再生,大大降低了可能的经济消耗。在进行不对称还原反应的过程,可以通过使用少量且廉价的碳源(如葡萄糖)作为辅助底物,从而来完成整个过程中的辅酶的再生[6]。

1.6 影响重组菌产酶条件的因素来.自>优:尔论`文/网www.youerw.com

影响醇脱氢酶活性的因素可以从碳源、氮源、初始发酵液的pH值、加入的诱导剂IPTG前培养的时间和加入诱导剂IPTG的量等方向。

1.6.1 碳源

碳源是所有小分子微生物成长的一类必须的营养物,是一种含碳的化合物。日常中,我们使用的碳源包括糖类、有机酸、油脂及小分子醇和有机酸酯。根据微生物产生的酶系种类不同,不同的微生物可以使用的碳源也不会完全相同。碳源不仅为微生物基本的生长代谢提供了细胞的碳骨架结构,而且还提供给细胞进行生命活动里必需的物质能量,还能为细胞提供合成产物时需要的碳链骨架。碳源在我们日常进行实验中制作微生物培养基或细胞培养基时,有着不可缺失的作用,它为微生物或细胞的生长和分裂代谢提供了有力的物质基础保障[9]。

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