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姜黄素抑制人肝癌HepG2细胞增殖相关基因的筛选研究(2)

时间:2021-08-25 19:57来源:毕业论文
中医药在预防癌症,辅助治疗和治疗癌症方面也具有一定的作用。很多的中医药有提高免疫力和健脾益气的作用,在一定程度上可以预防癌症的发生。在进

中医药在预防癌症,辅助治疗和治疗癌症方面也具有一定的作用。很多的中医药有提高免疫力和健脾益气的作用,在一定程度上可以预防癌症的发生。在进行化疗的同时服用正确的中药还可以起到减轻毒副反应和提高临床治疗效果。[2]总的来说中医药治疗癌症具备副作用少、避免复发和疗效好的特点。[3]

姜黄素(Curcumin)是中药姜黄中的有效成分。早于1300多年,姜黄就被作为中药记载于《唐本草》一书中姜黄素还是一种天然的食品添加剂,有通经止痛和破血行气的功效,但其具有不易溶于水,易溶于醋酸乙酯、甲醇、丙酮、乙醇和碱液中,见光易分解的特点。[4]姜黄素在体内的生物利用度较低,提高姜黄素生物利用度也将是姜黄素更有效的应用于治疗癌症亦或是其他疾病,所要解决的一个问题。经过去大量的研究数据表明姜黄素具有预防和治疗恶性疾病、抗癌的作用,包括肝癌。[5]姜黄素的分子式为C21H20O6,是一种透明的黄色的酚类化合物,其主链为不饱和的脂族和芳香族基团,近年来的研究表明,姜黄素对多种癌细胞的产生、增殖和转移都具有抑制作用,并且其可能的作用机制为改变细胞受体连接、阻断细胞内信号反应、诱导肿瘤细胞凋亡等途径。[6]

本次实验主要是应用半定量RT-PCR(即半定量逆转录酶链式反应)技术来进行研究。半定量RT-PCR定量RT-PCR在对实验条件上有所放宽,定量RT-PCR对实验条件的要求比较严格。半定量RT-PCR技术是指应用与待测目的基因无关联的管家基因,例如β肌动蛋白(β-actin)或甘油-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)等作为内标基因,进行半定量。半定量RT-PCR与传统的Northern blot相比较,具有灵敏快捷、特异性高的特点。[7]所以其在检测基因表达水平的上调或下调方面得到了广泛的应用。半定量RT-PCR技术,主要是用于检测mRNA的相对含量,通过提取出总RNA ,然后以mRNA为模版经反转录合成cDNA,再以得到的逆转录产物作为模版经特异引物PCR扩增出目的基因和内参基因,最后进行凝胶电泳。[8]

HSPA6又称Hsp70B′广泛存在于人类基因中,热休克蛋白可以防止聚合易发蛋白的错误折叠。[9]热休克蛋白是一组高度保守的蛋白质,参与细胞的修复和保护机制。

AMID也被称为AIFM2或PRG3。该基因编码黄素蛋白氧化还原酶,结合在单链的DNA上,被认为有助于促进细菌和病毒的死亡。这种基因的表达也发现,诱导结肠癌细胞的肿瘤抑制蛋白P53。

P53基因可以编码一种肿瘤抑制蛋白包含转录激活,DNA结合和寡聚化域。编码的蛋白对不同细胞压力调节靶基因的表达,从而诱导细胞周期阻滞,细胞凋亡、衰老、DNA修复或代谢的变化。这个基因的突变与多种人类癌症相关联,包括遗传性癌症Li-Fraumeni症候群等。P53蛋白的主要功能是作为转录因子控制大量的基因表达调节细胞凋亡、衰老、细胞周期阻滞和DNA修复。[10]

经研究表明Egr-1(Early growth response gene 1)是一个肿瘤抑制基因,由这个基因编码的蛋白质属于EGR家族C2H2-type锌指蛋白。按功能分大致为3个区域,其中331-426氨基酸残基组成3个C2H2型锌指结构,指端能与DNA结合,5‘-GNGT/GGGCT/CG-3(N代表任意核苷酸)是Egr1的最适结合序列。Egr1的作用主要是传递细胞内信号,参与基因的调控(包括生长因子基因、信号传导基因、转录因子基因、癌基因等)。对细胞生长、发育、分化和损伤修复起着重要的作用。[11]它是一个核蛋白质转录监管机构和功能。靶基因的产物是激活细胞分化与有丝分裂所必需的。

XAF1基因编码一种蛋白,该蛋白可结合到IPA(凋亡抑制因子)上,并消除凋亡抑制因子IPA蛋白家族成员的抑制作用。IPA家族蛋白结合并抑制半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡过程中被激活,XAF1是一种抑癌基因,它编码33.1kDa蛋白,该蛋白具有7个锌手指。XAF1表达的缺失或减少是由于启动子异常甲基化与很多癌症的晚期是相关联的。XAF1已被确认作为一种干扰素刺激基因有助于干扰依赖敏化细胞肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体。在肿瘤发生中p53蛋白与XAF1相互作用,介导细胞凋亡。[12]XAF1可调制不同细胞的肿瘤抑制基因、有丝分裂和凋亡等事件。[13] 姜黄素抑制人肝癌HepG2细胞增殖相关基因的筛选研究(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_80872.html

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