1。2方法 6

1。2。1细胞的冻存、复苏与培养 6

1。2。2 Trizol法提取总RNA 7

1。2。3第一链cDNA合成 7

1。2。4 RT-PCR 8

    1。2。5琼脂糖凝胶电泳 8

1。2。6扩增得到的Egr-1基因连接到pMD18-T载体 9

    1。2。7 pEGFP-Egr-1重组表达质粒的构建 9

    1。2。8转化大肠杆菌大量制备重组质粒pEGFP-Egr-1 DNA 9

    1。2。9细胞转染及其表达分析 9

2 结果 10

2。1细胞形态学观察 10

2。2 pEGFP-Egr-1重组质粒的构建 10

2。3 pEGFP-Egr-1重组达质粒在HepG-2细胞中的表达检测 12

3 讨论 13

参考文献 15

致谢 16

引   言

在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类，而肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致的异常增生与分化而形成的新生物。本研究的实验对象即为肝癌HepG-2细胞。肝癌是肝脏恶性肿瘤，其中原发性肝癌属于我国的高发病症，起源于肝脏的上皮组织，是全球第五大癌症，也是相较于肺癌和胃癌的第三致死原因，因肝癌而死的人在逐年上升[1]。Allemani C等人于今年3月份发表在 LANCET 上有关全球的癌症生存率调查显示，包括中国在内的所有67个国家肝癌仍是致命性疾病[2]。有专家预计，到2020年我国癌症新发病例将达到400万左右，每年病例总数将达到600万。这些无一不在说明对肝癌的预防和治疗迫在眉睫。论文网

目前肿瘤疾病治疗多采用多种治疗方式相结合，主要还是以手术治疗、放射治疗、化学治疗为主，但其副作用多，包括脱发、代谢异常、肝损伤、器官功能性损伤等[3-4]。而肝癌也多采用手术治疗（包括切割和移植）、经皮消融术（化学上包括酸-乙醇-乙酸；热辐射上包括微波、激光、射频和冷冻消融）、化疗、放射疗法以及系统治疗，选择一种合适的方法对于肝癌治疗来说尤为重要[5]。近年来，生物治疗和中医中药联合治疗已逐渐成为热点，对症下药，且副作用小毒性低，特别是多种药用植物，可以很好地控制肿瘤细胞的扩散。

本研究所采用的姜黄素，就是其中一味药用植物姜黄的主要组成成分，也是其最重要的活性成分。姜黄素作为一种天然有效成分，毒性低，药理作用广泛，已成为预防和治疗人类疾病的研究开发热点，其抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用及其相应的分子作用机制在很多种肿瘤细胞内都有所研究。例如姜黄素可以通过调节细胞内的多种分子，如转录因子、生长因子、蛋白激酶等，以各种不同的信号通路，进一步调节各种不同的相关基因的表达，最终抑制肿瘤细胞的增殖[6]。

Egr-1基因编码产物属于早期生长反应因子家族中的一员，能在外界刺激的诱导下迅速表达，与相应的靶基因结合，并直接或间接地调控下游的一系列基因的表达[7]。姜黄素与Egr-1的关系在很多肿瘤中都有所研究，Chen QY等人用姜黄素处理非小细胞型肺癌，结果发现Egr-1表达下降，判断姜黄素抑制非小细胞型肺癌细胞的增殖和迁移可能是通过Egr-1来调节Wtn信号通路和黏着连接作用实现的[8]；Anja 等人在小鼠胚胎成纤维细胞的实验中发现，Egr-1是p53参与细胞复制衰老和生长调节过程中的重要上游调节因子[9]。 Egr-1基因表达质粒的构建及其在细胞中表达分析(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_81754.html