在蛋白质和多肽的二级结构中，α-helix结构的红外光谱吸收位置分布在 1600cm-1~1650 cm-1范围之中， random coli 常在1643cm-1~1649 cm-1范围，β-sheet 在1600cm-1~1650 cm-1 和1675cm-1附近有三个吸收峰, β-turn结构在1665cm-1和1680 cm-1附近的两个吸收峰,  而蛋白质和多肽的侧链吸收峰一般在1612cm-1附近。

1。4。2  近红外拉曼光谱

激光拉曼散射光谱(Raman difference spectroscopy)所测量的拉曼频移是表征物 质分子振动-转动能级特性的一个物理量。通过对物质的拉曼光谱分析，可以从分 子结构上去了解物质的构成、特性、及其变化规律[24]。蛋白质作为生命的物质承 担者，是生命活动必不可少的组分，因此透彻了解蛋白质，了解它的正确结构具有 重要意义，但是目前掌握的灵敏检测蛋白质正确结构的方法大多比较难以完成或者 操作分析极其复杂。然而在过去十年中，光纤过滤器和电感耦合检测器的广泛使用 使得拉曼光谱的信噪比得到了显著的提高，这使得数字式拉曼光谱在分析蛋白质稀 溶液从而分析蛋白质正确结构成为了可能。综上所述，拉曼光谱技术现在已成为了 一种检测微观结构和构象变化不可或缺的工具[25]。拉曼光谱为我们研究生物分子 之间反应历程、集团变化、自组装等现象和研究蛋白质构象等方面提供了不可或缺 的渠道。

人们过去认为蛋白质是由线性的多肽在空间进行特定的盘曲折叠成特殊三维 结构，而只有具有特殊结构的蛋白才有生物活性。其实不然，在过去十年的研究中

发现，细胞中存在的一些缺乏三级或者四级结构的天然非折叠多肽仍然可以发挥重 要的生理生化功能。而这类蛋白质由于其缺乏独特结构，因此在过去使用检测蛋白 质的众多手段均难以检测和进行准确的特征描述，而拉曼光谱恰恰可以弥补这一部 分的缺憾，为我们分析这一类的多肽和简单蛋白质指出了一条光明的道路。

1。4。3  荧光光谱

荧光光谱法可以用来研究某些金属离子及药物小分子与蛋白质分子连结的相 关反应，从中可以获取大分子构象以及构象变化、小分子药理效应等有用信息，目 前已经引起了生命科学、化学、药学及临床医学科研工作者的普遍关注[26]。目前 研究较多的是一些对人畜有毒害作用的蛋白质分子和生物小分子，但是环境相关的 一些例如农药残留等与蛋白质分子之间关系方面的研究则相对比较少见。文献综述

荧光光谱法目前被广泛地应用于各种研究领域，是因为它具有灵敏度高、选择 性强、方法简便、用样量少以及可以提供较多的物理参数等优点。荧光光谱可以通 过测定不同环境下构象变化的形式，从而确定蛋白质结构的伸展与收缩从而可以进 一步阐释蛋白质结构与功能之间的关系。除此之外，荧光光谱还可以用作相关蛋白 质的定量分析。

色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)是含有苯环的芳香族氨基酸，在 280 nm 或 295 nm 激发光的激发下会产生荧光，这种荧光被称为内源性荧光(即天然荧光)。 蛋白质荧光也是来自于 Trp、Tyr、Phe 这三种氨基酸，其荧光光谱对环境变化极为 敏感，是以成为研究蛋白质的结构、折叠动力学以及蛋白质分子间相互作用的一种 较为实用的选择[28]。

根据上述性质，蛋白质中含有的芳香族氨基酸会吸收紫外光然后发射出荧光， 我们可以利用这种特性来研究不同蛋白质在变性和复性情况下整体的空间结构和 构象的变化趋势。它的基本物理学机理是:生色基团在不同的能级之间跃迁引发了 荧光的产生，而荧光频率则是因为能级之间的能量差不同，因为不同基团作用力不 同，因而生色基团与周围基团之间会彼此产生作用力从而使得其原先的激发态的能 力发生相应的改变，从而改变其发射荧光的频率与强度。环境的极性对荧光的最大 吸收波长有很大的影响，因此在不同环境条件下的同种荧光分子的最大吸收峰可能会截然不同。一般来说，极性的环境会对生色基团基态和激发态能级和能量产生一 定的影响，降低了激发态的能量，从而引起发射谱的谱线红移现象(即 λmax 增大)[28]。 天然蛋白质在形成四级结构的时候，芳香族氨基酸往往会被非极性氨基酸包埋在蛋 白质结构的核心部位，因此环境的极性较低。但是随着蛋白质变性的进行，蛋白质 麦胚降糖肽分离纯化及作用机理研究(7):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_95595.html