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萝藦科泰山白首乌中C21甾体苷元的分离与鉴定(5)

时间:2023-06-18 09:51来源:毕业论文
图 1总苷元和Fr3。1。3。3。7TLC图 注:1为总苷元,2为Fr3。1。3。3。7,展开剂为氯仿:甲醇:水(15:3:1) 左边为10%硫酸乙醇显色,右边为碘缸显色 2硅胶柱

图 1总苷元和Fr3。1。3。3。7TLC图

注:1为总苷元,2为Fr3。1。3。3。7,展开剂为氯仿:甲醇:水(15:3:1)

左边为10%硫酸乙醇显色,右边为碘缸显色

2硅胶柱层析

拌样:粗提取物和硅胶按1:3的比例称取硅胶。用适当溶剂溶解粗提取物直至全部溶解,若溶解效果不佳可稍微加热溶解或超声,全部溶解后加到已称取硅胶中。用旋转蒸发仪将溶剂蒸干,使样品全部吸附在硅胶上,最后得到柱层析所需样品。

湿法装柱:选择适当直径和长度洁净的玻璃层析柱。将适量硅胶与洗脱剂混匀,需要将气泡去除后再将混悬液缓慢倒入玻璃层析柱中,打开玻璃层析柱的阀门,使硅胶慢慢沉降,沉降过程应注意硅胶不能变干,待沉降完全后将关闭阀门。文献综述

干法装柱:选择适当直径和长度洁净的玻璃层析柱。将适量硅胶装入层析柱中,保持层析柱阀门开放状态,压实。

上样:干法上样,使硅胶柱平整后,将拌样得到的样品在柱面上铺平,开始加入起始洗脱剂,使样品慢慢润湿,样品润湿后,将阀门打开,收集所流下的洗脱液。湿法上样,用尽量少的初始洗脱剂将浓缩后的样品完全溶解,直接液体上样。

洗脱:梯度洗脱,根据薄层层析法(TLC)选择的条件,按极性大小从小到大的顺序,选择不同梯度进行洗脱,收集洗脱液。

回收组分的处理:用薄层层析法进行检测,把Rf值基本一致且显色相同的洗脱液进行合并。收集到的各个组分用旋转蒸发仪39℃减压浓缩。

硅胶柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶柱上的吸附力不同而分离,一般情况下是吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程。点样时几个样点要在一条直线上,大小要合适,斑点直径一般不超过2mm,间距5-6mm,如果溶液较稀,一次点样不够需要重复点样,待前次点样溶剂挥发后再重新点样,以防止点样点过大,造成拖尾、扩散的现象,影响分离效果,应注意点样时的毛细管不能交叉使用。

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