1.1.4 常用定量方法

MALDI定量常用方法：标准加入法和内标法。标准加入法时间消耗较长样品试剂消耗较多，线性影响范围窄，因此内标法用的较多。内标法主要是加入和被测物物理化学性质相似的物质，通过测定样品峰和内标峰的相对比值来定量分析。常用内标物为：结构类似、同位素标记、同位素编码亲和标记等。提高MALDI定量性能方法有改变样品制备方法、改变样品结晶等方法。样品制备方法是使热不稳定的非挥发性大分子离子化的重要环节。自MALDI技术产生以来,样品制备方法一直是研究的一个重点,到目前为止已经有几十种方法,按其制备形式大致可分为三大类:液液法,液法,固固法。其中因液液法灵敏度高,使用简单而最为广泛使用,液液法的其基本过程为基体溶于水、或水与甲醇、乙睛的混合溶剂中,配成5-10g/L的溶液,样品以类似的方法配成1-10μM的样品液。两者再以一定比例混合,取0.5μL混合液点在样品靶上,干燥后分析。

1.1.5 基质选择

合适基质的选择是MALDI实验的关键,而在实验中选择何种基体来行样品分析严重依赖于所分析的样品(如样品的种类、质量大小及性质等等),同时分析中使用的溶剂也会影响基体的表现行为。一个好的基体首先必须对激光能量有很强的吸收,因而到目前为止文献报道较多的基体均为含有苯环的有机化合物。同时基体应有较好的亲合力,应与被测物质有很好的相容性,且不能有分子间的相互作用或化学修饰样品。当前使用较多的基体有三类,以-a氰基-4-羟基-肉桂酸(CHCA)为代表的肉桂酸衍生物、以2,5-二轻基苯甲酸(DHB)为代表的芳香梭酸衍生物及苯胺系列。2,5-二轻基苯甲酸是最常用的基体,产生的基体峰及基体缔合峰少,在各类大分子化合物中得到广泛的应用，在MALDI质谱实验中还也常常加入一些其它物质,这些物质通常称基体改性剂或辅助基体。辅助基体的作用有:)l提高样品基体结晶效果得到比较均匀分布的晶体结构;2)稳定分子离子,减少碎片离子产生:3)减少阳离子化程度;4)提高离子化效率;5)提高样品分析重复性;6)提高分析的分辨率。