1.2 半互穿网络结构水凝胶:
互穿网络聚合物[9]是两种或两种以上交联聚合物相互贯穿而形成的交织聚合物网络,可看成是一种特殊形式的聚合物共混物。由于互穿聚合物网络中各聚合物网络具有相对的独立性;同时,由于各聚合物网络之间的交织互穿必会产生相互影响与作用,使各聚合物网络之间具有一定的依赖性。这种既相互独立又相互依赖的特性[19]将最终决定互穿网络聚合水凝胶具有异于共聚物和接枝聚合物的特殊性能。
半互穿网络水凝胶 [10]是一条或者多条线性大分子链贯穿于聚合物网络中间,线性大分子链与聚合物网络结构没有化学结合,仅仅只是物理的贯穿。半互穿网络水凝胶具有互传网络水凝胶的绝大多数优点。
1.3 脂肪酶:
脂肪酶[1]即三酰基甘油酰基水解酶,是一种特殊的酰基水解酶,广泛的存在于动植物和微生物中。脂肪酶能够在油-水界面进行催化水解或醇解、酯合成、酯交换、多肽合成等反应,在制药、试剂、食品加工、生物能源等方面有着很大的应用前景。但是游离状态的脂肪酶不容易被回收重复利用,因此由于其价格的高昂,从而大大限制了脂肪酶的大规模应用。所以脂肪酶能否固定化在一定程度上决定了脂肪酶的广泛应用。因此将酶固定化就显得尤为重要、迫切了。
1.4脂肪酶的固定化:
酶的催化作用[2]主要由其活性中心完成,酶蛋白的构象也与酶活性密切相关。因此酶的固定化应尽量在温和条件下进行,以避免酶蛋白的高级结构遭到破坏。固定化酶是在1971年美国Henniker New Hampshire举行的酶工程会议上首次提出的,定义[3]为酶用物理或化学方法固定在空间的一个特定区域保存,酶的催化活性并且可以重复和连续使用。酶的固定化方法有很多[17],其中主要包括:吸附法、共价结合法、交联法、和包埋法。
吸附法:利用酶与载体吸附剂之间的非特异性吸附作用,将酶固定在吸附剂上,它分为物理吸附法和离子吸附法。
共价结合法:酶以共价键结合于载体的固定化方法。此法或是先将载体有关基团活化,然后与酶的有关基团发生偶联反应;或是在载体上接上一个双功能试剂,然后将酶偶联上去。
交联法:利用双功能或多功能试剂,使酶分子之间发生交联,凝集呈网状,而成固定化酶,戊二醛是应用最广的双功能试剂。
包埋法:将酶分子包埋于凝胶的网眼中或半渗透的聚合物膜腔中,以达到固定化酶的方法,包括网格型和微囊型两种。
本课题采用的是共价结合法固定化酶,即先将载体有关的基团活化,再在载体上接上一个双功能试剂——戊二醛,然后在双功能试剂的另一端接上酶分子。
目前,固定化载体的研究大部分集中在多孔粉体材料[4]上,例如介孔材料MCF,MCM-41等。但研究发现孔径较大的MCF(15.3nm)的酶固定化比孔径小的MCM-41(2.6nm)效果好。因为脂肪酶更容易被固定在孔径较大的孔隙中,且提高了单位载体上酶的固载量,从而提高单位酶活。如果在固定化介质中增加大孔的分布,则可提高固定化的速度,提高底物和酶之间的传质速度,提高反应效率。从以上分析可以知道,大孔径固定化酶载体材料的优势更加明显,然而目前有关这方面的研究相对而言较为匮乏。
将具有生物活性的基底固定在聚合物载体上的技术是一种使用广泛的技术。固定化酶技术有利于反应体系的纯化和酶的回收,也使得重复或连续使用酶成为可能。固定化往往伴随着酶的活性、最适pH、基底亲和力、酶的稳定性等等方面的变化而发生变化。这些变化取决于酶、载体、固定化条件等因素。源]自=优尔^`论\文"网·www.youerw.com/ 巯基固定的水凝胶负载酶体系研究(3):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_65482.html