本研究室从鹅观草中发现了内生真菌Epichloё sinica[6]。虽然还没有一套适用于鹅观草蛋白质组分析的双向电泳技术，但对于预期同属麦属的小麦的研究却又很多，改良的优化的方法也有很多[2, 4, 7-10]。因为鹅观草与小麦同属麦属，所以他们之间的研究方法肯定有许多的相似之处。我们只需要以适用于小麦蛋白质组分析的双向电泳技术为蓝本，加以运用与改进就可能找到使用于鹅观草的双向电泳技术。

本次课题以EI/EF鹅观草为材料，通过双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对EI/EF植物蛋白质组差异进行研究。

1材料与方法 

1．1 材料处理

1。1。1 种子选取

选取实验室保存的从同一植株中采集的含内生真菌Epichloё sinica 的鹅观草种子，其中一半放置于50℃温箱中处理24h,去除种子中的内生真菌[6]。

1。1。2 种子的发芽和幼苗栽培

用培养皿和滤纸制作湿室，将鹅观草种子进行表面消毒( 75% 乙醇 1 min，1%  NaClO 1 min，水洗) 后播种( 每皿 50粒) 。在约25℃的黑暗下催芽，每天换水 2 次。待种子露白后，播于装有营养土的穴盆( 4 cm×4 cm) 中，在室内育苗。当幼苗长超过5cm后在室外炼苗 1 周，再选择健苗移栽至试验田并编号。株距和行距各 25 cm。

植物移栽后一周内每隔两日灌溉一次,以保证幼苗的成活率,之后灌溉频率逐渐降低。在确定植物成活之后停止灌概,仅依靠自然降水补充水分。每周进行 1～2 次的手工除草或松土。

1。2 田间试验

去除意外受伤等不正常的植株，各选取20株每月统计一次分蘖情况。于5月份进行形态学检测，测量指标包括株高、茎秆直径、叶宽、成穗分蘖。采用直接计数的方法测定成穗分蘖数;测定叶片宽度时,对其旗叶下的第一片叶的最宽处进行测量；株高为植株最高点距地面的垂直距离;茎秆直径为旗叶下的茎秆的直径。利用 SPSS 18及excel，通过独立样本T检验对数据进行统计分析。

1。3 内生真菌检测论文网

1。1。1植物样品的采集、保存

挑选试验田中含有内生真菌的与不含内生真菌的植株各20株，将挑选的植株样品选取一直分蘖，从茎基部剪短，采集到的植株样品放入样品袋，带回实验室或与4℃低温保存[11]。

1。1。2 检测方法

采用孟加拉红染色法检测内生真菌。用镊子撕取叶鞘内表皮，在碱性孟加拉红染色液(含1%孟加拉红的1 mol/LNaOH溶液)中染色1~2min后，再在酒精灯上加热几秒钟，在光学显微镜下(10×20)下检测[6]。

1。4 蛋白质组实验

1，4，1 材料

上述田间实验的EI/EF植株。

1。4。1．1主要试剂

美国伯乐公司试剂:Acr(Acrylamide)、N，N’ -Methylene-bis-acryLamiDe、 Tris(Tris［ hydroxymethyl］ aminomethane)、DTT(Dithiothreitol)、TEMED( N，N，N，N’-Tetramethylethylene-diamine)、Triourea、Urea、AP( Ammonium Persulfate)、固相 pH 胶条(17 cm)、两性电解质( Bio-Lyte)( pH3~pH10);国产分析纯试剂:十二烷基硫酸钠(SDS)、β－巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)、琼脂糖凝胶(DEAESepharose Fast Flow)、甘氨酸(Glycine) 、考马斯亮蓝 G250( Comassie brilliant blue G) 、甘油/丙三醇( Glycerin) 、溴酚蓝( Bromophenol blue) 、冰醋酸/乙酸( Acetic acid) 、95% Ethanol、磷酸( Phosphoric acid) 、3［ 3( 胆酰胺丙基) 二甲氨基］丙磺酸内盐( CHAPS Detergent)、丙酮、盐酸．

1。4。1。2主要仪器

PROTENAN IEF Cell(美国伯乐公司)、PowerPacTM Universal(美国伯乐公司)、TU1901双光束紫外可见分光光度计( 北京普析通用仪器有限责任公司)、T15RE 超速冷冻离心机( Hitachi Koki Co．，Ltd)、UNAX Power look 2100XL-USB彩色扫描仪(利翔航太股份有限公司)。 内生真菌对鹅观草生长的影响及其蛋白质组差异的研究(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_102004.html