5’-RACE-Ready cDNA    3’-RACE-Ready cDNA
总RNA          1.0-2.75μL（1μg）
5’-CDS Primer A   1.0μL
Deionized H2O    Up to 3.75μL    总RNA          1.0-2.75μL（1μg）
5’-CDS Primer A   1.0μL
Deionized H2O    Up to 3.75μL
    3.轻轻弹管壁使其混匀。72摄氏度温育3分钟，再42摄氏度温育2分钟，14000 g离心10秒。
    4.在5'-RACE-Ready cDNA中加入1μL SMARTer IIA oligo，在充分混匀之后离心。
    5.准备Marster Mix:
       Buffer Mix(来自第1步)           4μL
       RNase Inhibitor (40 U/μL )      0.25μL
       SMART Scripe RTase(100 U)        1μL      
       总体积                           5.25μL
    6.将5.25微升的Master Mix分别加入两个管中。
    7.轻轻混匀，短暂离心，42摄氏度温育90分钟， 70摄氏度温育10 分钟。
    8.加入20微升Tricine-EDTA Buffer，置于-20摄氏度保存备用。
1.5 PCR反应
1.5.1普通PCR反应
    普通PCR反应体系:
            cDNA模板                        1μL
            Premix Taq                      12.5μL
            上游引物(10μmol/L )             1μL
            下游引物(10μmol/L )             1μL
            ddH20                           9.5μL        
            总体积                          25μL

1.5.2 RACE PCR反应
    RACE PCR反应体系:
            10x LA PCR buffer                2.5μL
            MgCl2 ( 25 mM )                  2.5μL
            dNTP Mixture(各2.5 mM)           4μL
            UPM/NUPM                         2.5μL
            GSP/NGSP(10mmol/L)               0.5μL N6AMT基因和长链非编码RNA在褐飞虱生殖(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_18859.html