SNP处理：通过Al处理获取适宜的Al浓度（便于叙述暂时记为aμmol/L）进行下述实验。

设置处理组：1）CK：全营养液培养；

2）Al+0：aμmol/L；

3）Al+50：aμmol/L+50μM SNP；

4）Al+100：aμmol/L+100μM SNP；

5）Al+200：aμmol/L+200μM SNP；

6）Al+300：aμmol/L+300μM SNP。

注：全营养培养液为4mmol/L KNO3，1mmol/L NaH2PO4，1mmol/L MgSO4，1mmol/L CaCl2，1mg/L柠檬酸铁，pH 5。5。

1。2 相对根伸长量的测量

将Al处理后培养一周的大麦幼苗取出，平铺在干净的桌面上。梳理根系后，从种子的根基部开始用直尺测量其根系的最长根，测量后记录实验数据。将各组大麦幼苗用蒸馏水进行冲洗，在将大麦幼苗培养于含有SNP的培养液中，5天后，测量各处理组根的长度，并计算各组的相对根伸长量。论文网

计算公式如下：

相对根伸长量（RER）= 待测组根伸长量（实验组）/CK组根伸长量（对照组）×100%[20]。

1。3大麦生理生化指标测定

1。3。1粗酶提取液的制取

称取各实验组大麦幼苗叶片于预冷的研钵中，加入10ml 0。05mol/L pH值为7。8 的PBS 和适量石英砂于冰浴中研磨至浆，将研磨样品放入15ml的离心管中，于4℃冷冻10,000×g离心20min，取上清液（即为粗酶提取液）于洁净试管中，标记，置于－4℃冰箱中保存，备用。

1。3。2超氧化物歧化酶（SOD）活性

超氧化物歧化酶（SOD）活性测定采用氯化硝基四氮唑蓝（NBT）光化还原法[21]。步骤如下：

1）配置NBT反应液：500mlPBS、加入0。965g甲硫氨酸（待完全溶解后再加入其它物质）、0。0229gNBT、0。0196gEDTA、0。00023g核黄素（测定前加入并进行测定）。

2）准备13支洁净试管，分别加入3mlNBT反应液，各加入100μL的粗酶提取液，放于4000lux下光照15min，CK组为：3mlNBT反应液＋100μL提取缓冲液。在560nm波长下进行比色。

3）计算：

SOD活性(U•g-1FW)=[(OD对照-OD测试)/OD对照]×(100/50)×稀释倍数/鲜重。

1。3。3过氧化物酶（POD）活性

过氧化物酶（POD）活性测定采用愈创木酚氧化法[22]。取100μL的粗酶提取液，加入2700μL PBS（25mM，PH7。0，+2mM EDTA），加入100μL的愈创木酚（1。5%，1。5ml定容于100ml），再加入100μL H2O2（300mM，1。53ml 30%的H2O2定容于50ml）；摇匀，迅速转入比色皿，用SHIMADZU UV-2450PC紫外分光光度计酶动力学软件在A470下测定吸光度的变化。

计算POD活性，公式如下：

POD活性(U•g-1FW•min-1)=(C•(A•V)/a)/(E•W)

（其中C：活性测定值；A：反应液体积；V：提取液总体积；a：测定用提取液；W：样本重；E=26。6mM/cm）

1。3。4过氧化氢（H2O2）含量

过氧化氢（H2O2）含量测定采用紫外分光光度技术[23]。

1）制作标准曲线：

①取离心管编号后，按表1加入试剂。

表1 测定H2O2浓度标准曲线配置表

试剂（ml） 离心管号

1 2 3 4 5 6 7

100μmol/L H2O2 0 0。1 0。2 0。2 0。6 0。8 1。0

4℃下预冷丙酮 外源NO对大麦幼苗铝胁迫缓解作用的生理及分子机制研究(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_196297.html