1。3 研究目的与意义

本研究根据其他近源鱼类 igf 基因的保守序列设计简并引物，拟克隆获得华鳈 igf 基因 序列，获得华鳈 igf cDNA 片段，并其进行了同源性比较和进化分析，为今后在华鳈中开展 该基因的多态性位点与分子标记辅助育种等提供基础资料，为华鳈的生长性状研究提供参 考。

2 材料与方法

2。1 实验材料

2。1。1 实验所用仪器

VORTEX-5  震荡器 海门市其林贝尔仪器制造有限公司

Mini-7k  微型离心机 杭州奥盛仪器有限公司

Gel DocTM EZ Imager  凝胶成像系统

DYY-6C 型 电泳仪电源 北京市六一仪器厂 UVG20 紫外分析仪 上海领成生物科技有限公司 Eppendorf 单道微量可调移液枪

ND-2000C 微量紫外分光光度计 Gene Company Limi 基因有限公司

DK-S24 电热恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司 太仓精宏仪器设备有限公司

SN210C 灭菌锅

HPS-160 生化培养箱

DH6-914385-Ⅲ  电热恒温鼓风干燥箱 上海新苗医疗器械制造有限公司

IMS-100 全自动雪花制冰机 常熟市雪科电器有限公司 TGL-16GB 高速台式离心机 上海安亭科学科学仪器 BSA124S  电子天平 塞多利科学仪器（北京）有限公司

2。1。2 实验所用药剂

LB AMP+ 有氨苄青霉素 LB 液体培养基

LB AMP-    无氨苄青霉素 LB 液体培养基

Gel Extraction Kit 快速琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 康为世纪生物科技有限公司

AGAROSE G-10 琼脂糖

HiFi-Script cDNA 第一链合成试剂盒 北京康为世纪生物科技有限公司

2。1。3 实验样品 华鳈取自洪泽湖，体格较好，无伤病。 2。1。4 试剂的配置文献综述

AMP+LB 固体培养基的制备（250ML）：2。5 g 胰化蛋白胨、1。25 g 酵母提取物、2。5 g NaCl、3。75 g 琼脂粉和 175 ml 纯水，用 10 mol/L 的 NaOH 调节 PH 至 7。5，并补充纯水定 容到 0。25 L，再用高压灭菌锅灭菌。待培养基温度降至 55 ℃左右时，加入 0。5 ml 氨苄青 霉素（Ampicillin）（50mg/ml），充分摇匀后，在超净工作台内倒板，一般 10 ml 倒一个 板子，待平板中的培养基凝固后，用封口胶密封，至于 4 ℃保存备用。

2。2 实验方法

2。2。1 RNA 引物设计

根据已有的鱼类 igf 基因信号肽，找出其保守序列，设计简并引物，引物由生工生物 工程（上海）股份有限公司合成序列如