Mini-7k 微型离心机：杭州奥盛仪器有限公司；

Gel DocTMEZ Imager 凝胶成像系统；

DYY-6C 型电泳仪电源：北京市六一仪器厂； UVG20 紫外分析仪：上海领成生物科技有限公司； Eppendorf 单道微量可调移液枪；

ND-2000C 微量紫外分光光度计：Gene Company Limi 基因有限公司；

DK-S24      电热恒温水浴锅：上海精宏实验设备有限公司太仓精宏仪器设备有限公司；

SN210C 灭菌锅；

HPS-160 生化培养箱；

DH6-914385-Ⅲ电热恒温鼓风干燥箱：上海新苗医疗器械制造有限公司； IMS-100 全自动雪花制冰机：常熟市雪科电器有限公司；

TGL-16GB    高速台式离心机：上海安亭科学科学仪器；文献综述

BSA124S     电子天平：塞多利科学仪器（北京）有限公司；

THZ-300C      恒温培育摇床：上海一恒科技有限公司上海一恒科学仪器有限公司。

2。1。3 试剂的配置

AMP+  LB 固体培养基的制备（250 ML）：2。5 g 胰化蛋白胨、1。25 g 酵母提取物、2。5

定容到 0。25 L，再用高压灭菌锅灭菌。待培养基温度降至 55℃左右时，加入 0。5 ml 氨苄青 霉素（Ampicillin）（50 mg/ml），充分摇匀后，在超净工作台内倒板，一般 10 ml 倒一个 板子，待平板中的培养基凝固后，用封口胶密封，至于  4℃保存备用。

2。2 实验方法

2。2。1 引物设计

根据已报道鱼类 Hepidin 基因 cDNA 序列，找出其保守序列，用软件 Primer5 设计简 并引物，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成序列如下：（表   1）

表 1 本研究所用 Hepcidin 基因引物信息

引物名称

Primer Names

上游引物

Forward Primer

下游引物

Reverse Primer 退火温度

Annealing Temperature

片段长度

Products Length

2。2。2 RNA 的提取

解剖活体华鳈，取皮肤、肌肉、肾脏、性腺、脾脏、肝脏、肠、心脏、中脑、下丘脑 和垂体，这 10 处组织各 50 mg，迅速地加入 500 uL TRIzol Reagent 提取液的 2 mL 的 EP 管中，用匀浆器在冰上将样品彻底匀浆。匀浆后在室温下放置 5 min，目的是彻底分裂核

蛋白复合体。随后加入 0。1 mL 氯仿剧烈摇晃 15 s，充分混合后，室温静置 2-5 min