运用λ-RED重组技术构建APECE1株ssrA基因突变株

摘要：禽致病性大肠杆菌属于肠道外致病性大肠杆菌的成员，定植于肠道外，能够引起禽的局部或全身感染性疾病-大肠杆菌病。禽大肠杆菌病已成为最严重的细菌性传染病之一，给全世界养禽业造成了重大的经济损失。本文通过λ-RED重组系统等方法，摸索构建大肠杆菌的ssrA基因突变株的方法。90737

毕业论文关键词：APEC,突变株,λ-RED重组

Abstract： E。 coli (APEC) is a member of the parenteral pathogenic Escherichia coli, colonized outside the intestinal tract and can cause local or systemic infectious diseases of the birds - E。 coli disease。 E。coli disease has become one of the most serious bacterial infections, causing significant economic losses to the world's poultry industry。 In this paper, we used the method of λ-RED recombination system to explore the method of constructing ssrA gene mutant of Escherichia coli。源G于J优L尔V论N文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201`8766

Keywords：APEC,extension PCR,λ-RED recombination

1。前言 3

2。材料与方法 3

2。1 材料 3

2。2 方法 4

2。2。1 质粒pMD-T-ssrA：：Cat的构建 4

2。2。1。1 pKD3质粒的提取 4

2。2。1。2 PCR扩增cat片段 5

2。2。1。3 感受态DH5α的制备 6

2。2。1。4 PCR产物与pMD18-T Vector载体的连接 6

2。2。1。5 连接产物的转化 6

2。2。1。6 转化后质粒的验证 7

2。2。2 电转化感受态细胞的制备及转化 7

2。2。2。1 PCR产物的准备 7

2。2。2。2 电转化感受态细胞的制备 7

2。2。2。3 质粒pKD46的转化 7

2。2。2。4 Red重组功能的诱导和感受态细胞的制备 8

2。2。2。5 突变株的电转化构建 8

2。2。2。6 质粒pKD46的消除 8

3。结果与分析 8

结论 12

参考文献 13

致谢 14

附录1 质粒pMD-T-ssrA：：Cat序列 15

1。前言来自优I尔Y论S文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766

大肠杆菌（Escherichia coli，E。coli）为埃希氏菌属（Escherichia）代表菌，革兰氏阴性短杆菌。一般多不致病，然而少数具有致病性。致病性的大肠杆菌可分为二大类：肠道致病性大肠杆菌和肠道外致病性大肠杆菌（ExPEC）。禽致病性大肠杆菌（APEC）属于ExPEC的成员，定植于肠道外，能够引起禽的局部或全身感染性疾病-大肠杆菌病[1]。最常见的是由呼吸道感染开始(气囊炎)，紧接着出现肝周炎，心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、脐炎、关节炎、全眼球炎、肿头综合征、肉芽肿、败血症等，有时甚至引起脑炎。[2]。随着集约化养禽业的发展，该病已成为危害养禽业的重要细菌病，给养禽业带来严重威胁和造成重大经济损失[3]。大肠杆菌具有宿主泛嗜性，它可以感染几乎所有家禽、野禽、水生哺乳动物、猪、马、牛及人类等，在公共卫生和兽医学上具有重要研究意义[4]。运用λ-RED重组技术构建APECE1株ssrA基因突变株:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_198059.html