德国的1例46岁男性在心肌梗死后进行移植自体骨髓间充质干细胞的治疗并证实有效的案例首次证明了骨髓间充质干细胞可以治疗心肌梗死[7]。随后有研究证明, 将BMSCs注射到心肌梗死后的瘢痕组织, 可以减少瘢痕组织面积, 提高心功能, 预防心室重塑。论文网

在体外进行间充质干细胞分化为心肌细胞的实验中，可观察到骨髓间充质干细胞逐渐由纺锤形演变为短杆状，而后细胞以突起相互连接呈网状结构，进一步呈竹节样，最后相邻几个细胞融合形成多核或成簇样的肌管结构[8]。

近年来的研究则证明了除部分骨髓间充质干细胞分化替代为心肌细胞，还有骨髓间充质干细胞的旁分泌发挥更为关键的作用[9-11]。为了提高BMSCs发挥减少心肌细胞死亡，提高心功能的作用，各研究团队通过对MSCs进行不同的基因修饰来提高其功能。[9-11]MSCs对心肌梗死的治疗很大的局限就是在心梗的缺氧缺血的状态下，MSC自身的存活情况令人堪忧，在短时间内MSCs会大量死亡，并且其凋亡后的碎片会诱导M1型巨噬细胞的产生和迁移，导致炎症的扩大，从而对心梗治疗起到副作用。

在本实验中我们试图研究不同数量的MSCs对缺氧缺血的心肌细胞存活和凋亡的影响。

2  实验材料

2。1  细胞

用清洁级、健康的体重为60-100g的雄性的10-14天SD大鼠数只提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）。用出生2-3天的SD大鼠乳鼠数只，体重在8g- 10g左右，提取幼鼠心肌细胞（CMs）。实验大鼠购自于上海斯莱克实验动物有限责任公司。购进后饲养于苏州大学心血管病研究所动物观察室，所有实验大鼠的喂养及观察均严格按照《非临床研究管理规范》的规定严格执行。

2。2实验试剂

胶原酶Ⅱ购自于美国Sigma公司，DMEM 低糖培养基购自于美国Gibco公司，DF12培养基购自于美国Gibco公司，胎牛血清(FBS) 购自于Invitrogen 公司，0。25%胰酶+0。02%EDTA 购自于美国Sigma公司，anti-ratCD45-PEcy7、anti-ratCD11b-FITC、anti-rat CD90-APC购自于eBioscience。

2。3实验仪器文献综述

超净工作台 CA950-2，倒置相差显微镜，冷冻离心机 TGL-20M，电子天平 TP1102，高速离心机，低氧培养箱，酶标仪，流式细胞仪，心外科手术器械。

3  实验方法

3。1大鼠BMSCs的分离和培养 

（1）预备好两个培养皿、灭菌后的器械及DF12培养基放在超净台中备用。

（2）取出生约12天、体重约80g的雄性SD大鼠2只，巴比妥麻醉法处死后在75％的酒精中浸泡3min左右取出，转移至超净工作台。无菌操作下在大鼠腹部做一横切口，剥离皮肤，防止细菌污染细胞；分别剪取双下肢股骨部分，剔尽其上附着的肌肉和筋膜等软组织。用剪刀剪去两端长骨的干骺端，暴露骨髓腔，用于后期骨髓的获取。

（3）用注射器抽吸DF12培养基冲洗骨髓腔，直至骨髓腔变为白色，收集冲洗液(骨髓细胞悬液）于无菌的离心管里。