2。叶绿素含量的测定：取80%的丙酮溶液10ml，称量0。1 g的马尾松叶片置于其中，放在黑暗处两天，每天用涡旋振荡器震荡两次，取上清液，用分光光度计测定A440、A645、A663，测定出叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素以及总叶绿素的浓度（mg/L）利用下面的公式。

Ca=12。7 A663-2。69 A645

Cb = 22。9 A645-4。68 A663

Ck =4。7 A440-0。27 Ct

Ct = Ca+Cb = 20。2 A645+8。02 A663, Ct：叶绿素总量；Ca：叶绿素 a；Cb：叶绿素 b；Ck：类胡萝卜素。

2。3。2 Al元素含量的测定

Al含量的测定采用邬智高等的方法。取10 g马尾松幼苗，在干燥箱中先烘干取出烘干的幼苗进行磨碎处理，称取0。1 g放入坩埚中 (每组处理3个重复)，加入200 μl无水乙醇，在马弗炉中经过200°C、30 min→300°C、1 h→550°C、12 h灰化后，待温度降到100°C左右时取出，加入同时加入1 ml HNO3和1 ml去离子水，消解充分后转移到已作去离子处理的小瓶中，稀释50倍后用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定Al的含量。

2。3。3 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）

1。试剂的配制

（1）0。05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7。8) ：

A母液：0。2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358。14）71。7g；

B母液：0。2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156。01）31。2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0。05mol/L PBS（pH7。8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228。75ml，B母液(NaH2PO4) 21。25ml，用蒸馏水定容至1000ml。

（2）14。5mM甲硫氨酸溶液：取2。1637g Met用磷酸缓冲液（pH7。8）定容至1000ml。

（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0。001g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。

（4）60μM核黄素溶液：取核黄素0。0024g用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。

（5）2。25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0。1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。

2。酶液制备：论文网

取0。5g马尾松的根洗净后置于预冷的研钵中，加入1。8ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7。8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，酶液是上清液。

3。酶活性测定

（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取6ml核黄素溶液，磷酸缓冲液5。4ml，Met溶液162ml，0。6ml EDTA-Na2溶液， NBT溶液6ml，混合后摇匀；

（2）取40μl酶液和4ml反应液混合于试管中

（3）光照培养箱中设置光照值3500 lux将试管置于其中15min；

同时做两支对照组，其中1支试管取4ml反应混合液加入40μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原组，另1支置于暗中且只加入缓冲液的对照管测定时用于调零。

（4）以暗中处理的对照管调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。

（5）酶活性计算： 

SOD总活性＝[( Ack-AE )×V]/（1/2Ack×W×Vt）

SOD比活力＝SOD总活性/蛋白质含量

SOD总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW）；酶单位每毫克蛋白表示比活力单位；Ack为照光对照管的吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml,1。6ml，加入PBS的体积)；Vt为测定时的酶液用量（ml，30ul）；W为样品鲜重g；蛋白质含量单位为mg/g。

2。3。4 过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚法）

（1）试剂配制：文献综述

0。2mol/L磷酸缓冲液(pH6。0)：分别取A母液(Na2HPO4) 123ml和B母液(NaH2PO4) 877ml混匀即为1000ml PBS(0。2M，pH6。0)；

（2）反应混合液配制（以60个样为准）：

取200ml PBS(0。2M，pH6。0)，加入0。076ml液体（原液）愈创木酚（2-甲氧基酚）加热搅拌溶解，冷却后加入25％的H2O20。115ml，混匀后保存于冰箱中备用。 酸化环境下铝离子对马尾松萌发和生长的危害研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_202266.html