2  实验材料与方法

2。1 材料处理论文网

用1000ml的水加2。5g的虫卵和30g食盐孵化24小时后，去除溶液上的虫壳，将丰年虫过滤出来，再用500ml的水加上100uL ET 母液（雌二醇母液1mg/ml），将丰年虫放在上述溶液中浸泡一小时，过滤2次，换清水，用吸管吸取丰年虫喂食仔鱼。

上述步骤持续42天，42天之后不用浸药，直接漂洗后喂鱼到10天、13天、28天、29天、30天、31天、36天。

喂养结束后，从中选取较完整乌苏里拟鲿作为实验材料，再用4%的多聚甲醛固定48小时，30%、50%、70%梯度酒精脱色，样品置于70%酒精-20℃保存备用。

2。2 实验方法

本实验中采用了石蜡包埋技术，包括固定、脱水、透明、浸蜡和包埋步骤

2。2。1  脱水

为了给下一步的透明和浸蜡创造良好的条件，需要用一种脱水机将材料中的水完全脱尽。脱水机必须是和水能够混合的液体，酒精是最常用的脱水剂。酒精可与水在任何比例下相混合【5】，因此脱水能力较强，对组织有明显的收缩作用。在用酒精作为脱水剂时，因为容易造成对组织的过度收缩，浓度上应从低浓度逐渐向高浓度，递增的梯度逐步脱水。一般情况下，组织经过80%（酒精），85%（酒精），90%（酒精），95%（酒精），最后到无水酒精的脱水程序即可达到脱水的要求。如果有大量的组织材料同时开始脱水，为了将水份去除干净，95%酒精和100%酒精要进行两次脱水。具体步骤如下：将材料依次经过80%（酒精）→85%（酒精）→90%（酒精）→95%（酒精）→95%（酒精Ⅰ）→95%（酒精Ⅱ）→无水乙醇（Ⅰ）→无水乙醇（Ⅱ），在各浓度酒精停留时间依次为30min、30min、30min、30min、30min、1h、1h。注意在每个浓度脱水结束后应淋干在放入下一个浓度的酒精里。

2。2。2  透明文献综述

为了使石蜡渗透到组织中，以达到嵌入的支撑效果，必须有一个透明的过程，即将材料浸入蜡中。上述用的脱水剂酒精不能溶解石蜡与之混合[6]，因此需要一中媒剂既可以与酒精相混合，又可以与石蜡混合。浸蜡之前将组织放入该媒剂中，组织中的酒精被该媒剂取代完全时，组织即成透明状态，因此这种媒剂被称为透明剂。本实验中采用的透明剂为二甲苯，二甲苯可以迅速的使组织变的脆和硬，因此在二甲苯透明的时间不应该太长，组织变得透明即可达到效果。具体步骤如下：酒精：二甲苯1：1→酒精：二甲苯1：2→二甲苯（Ⅰ)→二甲苯（Ⅱ），时间分别为25min、20min、10min、10min。

2。2。3  浸蜡

组织经过二甲苯的透明作用后，浸入熔化的石蜡中，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂。根据石蜡的熔点，浸蜡需要保持在54-60℃温箱内进行。选用的石蜡应不含有沙粒、其他杂质、水来保证石蜡的质量，具体步骤为：苯：石蜡1：1→苯：石蜡1：2→石蜡（Ⅰ）→石蜡（Ⅱ），上述步骤在恒温箱内（温度为58℃）完成，时间分别为20min、20min、1h、1h。