番茄Fruit weight 2。2（FW2。2）基因控制着30％的果实重量。大豆FW2。2同源基因被发现并命名为GmFWL1。该基因调控大豆与根瘤菌之间的共生固氮作用。在玉米中发现了两个FW2。2同源基因，其中CNR1能控制植株和种子大小，CNR2被发现与植株生长和杂种优势有关。另外，鳄梨FWL基因Pafw2。2-like显著影响果实的生长[5]。最近的研究表明Fruit weight 2。2-like（FWL）基因通过调控细胞分裂，在植物的生长发育过程中起着重要的作用。此外，水稻和拟南芥FWL基因被发现参与镉胁迫的响应[6]。拟南芥FWL基因AtPCR1定位在细胞膜上，该基因过表达显著提高了拟南芥植株对镉胁迫的抗性。水稻OsPCR1也定位在细胞膜上，其表达增强了酵母细胞对镉胁迫的抗性。水稻基因组中含有8个FWL基因[5]，但其他基因在镉胁迫响应中的功能尚不清楚。

本实验通过水稻营养液培养和不同浓度镉处理，采用real-time PCR分析了水稻FWL基因家族在镉胁迫下的表达模式，发现多个基因的表达被镉胁迫显著诱导，为其响应镉胁迫的功能研究奠定基础。

2  材料与方法 

2。1材料与处理

水稻品种中花11种子经过浸种、催芽后中放入人工气候箱水培，营养液配方参照国际水稻研究所（IRRI）的标准配方。生长14天后，挑选出生长一致且健壮的4叶期苗进行镉处理实验。镉处理浓度分别为0 μM，10 μM，50 μM和100 μM，以CdCl2形式加入。处理20小时后对根和叶片取样，每个处理设置3个重复。

2。2总RNA提取

2。2。1试剂

氯仿：异戊醇(24：1)、无水乙醇、DEPC H2O、DNase I、UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒

2。2。2操作步骤

参照UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒说明书进行

2。3反转录

2。3。1实验试剂论文网

第一链cDNA合成试剂盒（RevertAid Premium Reverse Transcriptase）(Thermo Scientific™ EP0733)

2。3。2操作步骤

（1）在冰浴的nuclease-free PCR管中加入以下试剂：

Total RNA                               X ul

Random Primer p(dN)6（100pmol）        1 l 

dNTP Mix（0。5 mM final concentration)）   1。0 l   

Rnase-free ddH2O                       定容至14。5ul

（2）轻轻混匀后离心3~5s，反应混合物在65°C温浴5min后，冰浴2min，然后离心3~5s。

（3）将试管冰浴，再加入下列试剂：

4。0 l    5*RT Buffer

          0。5 l    Thermo Scientific RiboLock RNase Inhibitor（20U）

          1。0 l    RevertAid Premium Reverse Transcriptase（200U）

（4）轻轻混匀后离心3~5s

（5）在PCR仪上按照下列条件进行反转录反应

① 25°C 孵育          10min         

② cDNA合成   50°C    30min

③ 终止反应     85°C  5min，处理后，置于冰上放置

（6）将上述溶液-20°C保存。

2。4荧光定量PCR检测

2。4。1实验样本

将cDNA样品稀释10倍作为模板上机检测。

2。4。2实时定量PCR试验材料及仪器

定量PCR试剂：SG Fast qPCR Master Mix（2X） （BBI） 

定量PCR仪： LightCycler480 Software Setup(Roche 罗氏)

2。4。3 PCR反应步骤

（１）配制反应混合液

Reaction Component 水稻FWL基因家族镉胁迫下的表达分析(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_203188.html