摘要荧光蛋白因可在活性细胞组织内表达，检测方便，灵敏度高而广泛运用在蛋白质相互作用的研究中。开花是植物生理活动中从营养生殖向生殖生长转变的重要节点，现有研究表明，FT（Flowering locus T）基因是调控开花的关键基因之一，为了研究植物开花基因FT蛋白在细胞骨架中的运输途径，以及FT突变体在本氏烟细胞中的蛋白定位结构特征，可能互做的植物细胞因子和机理。鬼笔环肽为重用的细胞骨架染料，但具有成本高与毒性大的缺点，因此我们通过采用基因融合的方法将本氏烟的actin（JQ256516.1|）[1]、内质网、微管基因分别用红色荧光蛋白（ MCherry）基因[2]标记，将开花（FT）基因用绿色荧光蛋白（GFP）基因标记，分别通过35s启动子在植物体内瞬时表达这些融合蛋白，然后以标有红色荧光的肌动蛋白（即微丝）、微管、内质网为定位坐标，通过荧光共聚焦显微镜来观察标有绿色荧光的开花基因的表达蛋白在细胞骨架中的定位情况、结构特征、以及它的运动特征等。71260
Abstract The study is in order to prove whether the expression protein transport of FT gene is associated with the cytoskeleton, as well as what is the protein morphological characteristics, the unknown mechanism of product of flowering mutant gene expression in tobacco cells. This experiment using gene fusion method to connect actin, endoplasmic and microtubule gene respectively with red fluorescent protein gene, connect Flowering Locus T gene with green fluorescent protein gene. And then instantaneously express the fusion protein in plant by 35 s promoter respectively. Finally, as actin gene, tubes gene and endoplasm gene to location coordinates to observe the localization, structure characteristics, and its characteristics of the movement of the expression flowering gene protein was tagged with green fluorescent in the cytoskeleton by confocal fluorescence microscope.
The result shows the localization of mutant FT protein in plant cells and co-localization results with the fluorescent protein MCherry labeled cytoskeleton.
毕业论文关键词：开花基因； 基因融合； 微丝基因； 肌动蛋白基因； 本氏烟； 定位;
Keyword: Flowering Locus T; gene fusion protein； actin；Tublin; N.benthamiana; Location;
目录
第一章 mFT-GFP融合蛋白的亚细胞定位观察 4
一、材料与方法 5
1. 植物材料及生长条件 5
2. 质粒材料 5
3. 试剂材料 5
二、实验方法 6
1. mFT-GFP质粒的转化 6
2. mFT-GFP质粒抽提 6
3. 含mFT-GFP质粒的农杆菌的转化 7
4. 含mFT-GFP质粒的农杆菌的培育 7
5. 含mFT-GFP质粒的农杆菌的注射接种 8
6. mFT-GFP荧光信号在本氏烟草叶片上的检测 8
三、结果与分析 9
第二章 mFT-GFP融合蛋白的细胞骨架荧光共定位观察 11
一、材料与方法 12
1. 开花基因FT蛋白的植物细胞定位研究:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_80882.html