3
1.1.3 白藜芦醇生物合成和生产方法 4
1.2 主要研究内容和研究目的 8
1.2.1 主要研究内容 8
1.2.2 研究目的 8
第二章 实验材料与方法 10
2.1 实验材料 10
2.1.1 引物、质粒及菌种 10
2.1.2 酶及化学试剂 11
2.1.3 培养基 11
2.1.4 主要仪器 11
2.2 实验方法 12
2.2.1 目的基因克隆及连接 T 载体 12
2.2.2 桑葚 RS3 基因酵母表达载体构建及在酿酒酵母中表达研究 17
2.2.3 重组菌株的发酵优化及白藜芦醇的检测 24
第三章 结果与分析 26
3.1 桑葚 RS3 基因的克隆以及 T 载体转化重组菌鉴定 26
3.1.1 桑葚 RS3 基因的克隆鉴定 26
3.1.2 重组菌的鉴定 26
3.1.3 RS3 基因序列分析 27
3.2 重组表达载体构建验证 28
3.3 重组酵母的发酵以及产物的检测 32
结 论 38
参 考 文 献 40
致 谢 43
第一章 绪 论
1.1 引言
1.1.1 白藜芦醇概述
白藜芦醇(Resveratrol，Res)，又名芪三酚，是一种植物的天然产物，由于具有 许多保健作用，使其在化学学术研究和工业用途方面都具有很强的吸引力。Res 分 子结构式：C14H12O3 ；分子量：228.24。仅存在于某些高等植物中，在特定条件下 生成的一种重要的产物，能够起到良好的抗氧化，延缓衰老，抗肿瘤，抗炎症，调 节雌性激素，预防心脑血管等疾病，同时防止动脉粥样硬化等多种药理作用，同时 有助于增强植物的抗逆性。二苯乙烯是来自苯丙烷类家族中的天然产物，展现出广 泛的化学结构物质和生物活性。 二苯乙烯的白藜芦醇可以在红葡萄酒中发现，并 与其他多酚类化合物一起被认为具有降低冠心病风险的作用。即使需要更多的体内 验证来表明白藜芦醇具有保护心脏的作用，但一些研究已经表明，白藜芦醇具有强 大的抗氧化性能，理论上能够通过抑制脂质过氧化，从而使得低密度脂蛋白分子得 到有效保护以及预防动脉粥样硬化等情况的出现。白藜芦醇具有的其他一些效应， 如抗肿瘤、降血糖和抗微生物剂等。在自然界中，白藜芦醇存在顺式和反式两种化 学结构，主要以反式白藜芦醇的形式存在。如图 1-1 所示为其顺/反式化学结构。
图 1-1 白藜芦醇顺式与反式结构示意图
Fig.1-1 Structure of trans-Resveratrol and cis-Resveratrol
天然白藜芦醇是无色无味的针状晶体，在一些有机溶剂中溶解度很高，如乙醇、 丙酮、氯仿、乙醚等。白藜芦醇在光照条件下极不稳定，且对于碱性条件（pH>7.0） 比较敏感，容易分解，因此，需要在低温、酸性条件（pH<7.0）且遮光的条件下保 存。当用波长为 366 nm 的紫外光对白藜芦醇进行照射时，会有荧光现象的产生， 在 K4[Fe(CN)6]·FeCl3 溶液中会呈现蓝色，而和碱性溶液如氨水等反应则会显现变 红。表 1-1 所示为其具体的理化性质。 桑葚白藜芦醇合成酶RS3在酿酒酵母异源表达(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_203698.html