绪论图-2 茶树(Camellia sinensis)
一般来说,抗体具有特异性中和抗原、杀灭细菌、介导调理吞噬病毒、激活补体等免疫功能,从血清中提取抗体是最常见的方法之一。[21]本课题通过茶树Cystatin-福氏佐剂混合乳化作为抗原免疫小鼠获得抗血清,常见的免疫途径及优缺点,见绪论表-1。
绪论表-1常见免疫途径的优缺点[22]
途径 细节 优点 缺点 物种
皮下
(s.c.) 最常用优选途径,不要在捆绑固定的身体部位注射,注射点不要超过5个 可以注射相对大的体积,炎症过程易于监测 吸收慢 所有物种
肌肉注射
(i.m.) 骨骼肌血管丰富 快速吸收;特别是对大型动物,可以注射相对大的体积 注射到封闭空间,在肌肉中易引起疼痛;抗原和佐剂沿着界面和神经束扩散,易损伤神经或产生其他严重副作用 不推荐在啮齿动物中注射油性佐剂
腹腔
(i.p.) 抗原提呈的有效途径(由呼吸活动帮助转运,容易进入淋巴) 相对大的接种体积 注射失败率相对较高,油性佐剂易产生腹膜炎,增加注射过敏性休克风险 主要为啮齿动物
静脉
(i.v.) 不可溶性抗原不可用,抗原不推荐注射油性佐剂,抗原主要递送到脾脏,接着到淋巴结 抗原快速分布 增加注射过敏性休克风险 可用于所有物种,但仅为可溶性抗原
真皮
(i.d.) 每只动物免疫注射次数应少于5次 皮肤内高浓度树突状细胞快速递送抗原到淋巴结,少量抗原时即有效 使用油性佐剂引起溃疡 在啮齿动物中不推荐使用
采用腹腔注射免疫,免疫5周取血测效价,若达到理想值,即成功获得抗体。
茶树Cystatin抗体纯化简介
效价高的免疫血清对传染病的诊断与治疗、抗原分析、免疫球蛋白的鉴定以及其他研究有重要用途。[23]抗体纯化能够提高抗体纯度、效价,对抗体的后续使用具有重要意义。常见的抗体纯化方法如下[24]。
绪论表-2 常见的抗体纯化方法[24]
方法 容易程度 成本 适用性 特异性 主要用途 缺点 大样本纯化
硫酸铵/辛酸沉淀 非常容易 廉价 适用于所有血清和腹水,不适用培养上清 无 增加抗体的浓度 抗体纯度不高 可以
阴离子交换层析 稍有困难,必须知道抗体pH 中等廉价 适合大多数的抗体及亚型 无 适于去除非抗体蛋白、蛋白质A、DNA、内毒素反转录病毒。加样和洗涤过程中免疫球蛋白是可溶性的 对有些抗体纯化能力有限,DNA易与基质不可逆的结合 可以
阳离子交换层析 稍有困难,必须知道抗体pH 中等廉价 适合大多数的抗体及亚型 无 适于去除非抗体蛋白、蛋白质A。对免疫球蛋白有高结合力 对去除DNA及内毒素的效果中等。最佳结合条件可能会使某些免疫球蛋白沉淀。缓冲液会失效 可以
方法 容易程度 成本 适用性 特异性 主要用途 缺点 大样本纯化 茶树(Camellia sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)抗体的制备及纯化 (3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_20792.html