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过量铜及甲基紫精对MSR的表达调控研究(4)

时间:2018-09-11 08:42来源:毕业论文
ProB3下游引物(ProB3-R):5 TTTTTTTTCTTCCTTGGCGTG 3 ProA4上游短引物(ProA4_short_F):5 TGTGTGTGTGGCTGAAACCG 3 ProB3上游短引物(ProB3_short_F):5 ACTGTTTCATCTGCCCCCC 3 pGWB3下游


        ProB3下游引物(ProB3-R):5' TTTTTTTTCTTCCTTGGCGTG 3'
        ProA4上游短引物(ProA4_short_F):5' TGTGTGTGTGGCTGAAACCG 3'
        ProB3上游短引物(ProB3_short_F):5' ACTGTTTCATCTGCCCCCC 3'
        pGWB3下游短引物(GUS_R):5' TGCCGTAATGAGTGACCGC 3'
1.2.2.2  扩增启动子片段
    利用这两对引物从野生型日本晴基因组中进行 PCR 扩增 ProA4和ProB3 片段,PCR条件如下(反应体系50μl):
        5×Buffer        10μl
        dNTP            4μl
        F引物            1μl
        R引物            1μl
        Template        1μl
        GXL酶            1μl
        DdH2O            32μl
        总计            50μl
    PCR仪参数设置:预变性 98℃ 1min;98℃ 10sec,60℃ 15sec,68℃ 1min/kb,35个循环;后延伸 68℃ 7min。
    之后对PCR扩增产物进行跑胶验证,其中ProA4长度为2126 bp,ProB3长度为2254 bp。对验证成功的片段进行切胶回收。 过量铜及甲基紫精对MSR的表达调控研究(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_22858.html
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