ProB3下游引物(ProB3-R):5' TTTTTTTTCTTCCTTGGCGTG 3'
ProA4上游短引物(ProA4_short_F):5' TGTGTGTGTGGCTGAAACCG 3'
ProB3上游短引物(ProB3_short_F):5' ACTGTTTCATCTGCCCCCC 3'
pGWB3下游短引物(GUS_R):5' TGCCGTAATGAGTGACCGC 3'
1.2.2.2 扩增启动子片段
利用这两对引物从野生型日本晴基因组中进行 PCR 扩增 ProA4和ProB3 片段,PCR条件如下(反应体系50μl):
5×Buffer 10μl
dNTP 4μl
F引物 1μl
R引物 1μl
Template 1μl
GXL酶 1μl
DdH2O 32μl
总计 50μl
PCR仪参数设置:预变性 98℃ 1min;98℃ 10sec,60℃ 15sec,68℃ 1min/kb,35个循环;后延伸 68℃ 7min。
之后对PCR扩增产物进行跑胶验证,其中ProA4长度为2126 bp,ProB3长度为2254 bp。对验证成功的片段进行切胶回收。 过量铜及甲基紫精对MSR的表达调控研究(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_22858.html