1.1.3 禽流感病毒
H9N2禽流感病毒,为本实验新分离保存毒株,分离于江苏某养殖场。
1.1.4 培养基和溶液的配制
LB 液体培养基:Tryptone 10g,Yeast Extract 5g,NaCl 10g;称量上述成分于1000mL 容量瓶中,加入去离子水定容至1000mL,121℃高压灭菌 20min。
Amp+/K+LB 液体培养基:于 LB 液体培养基中,加入氨苄青霉素/卡那霉素至液终浓度为100µg/mL。
Amp+/K+LB 固体培养基:称取 1.5g琼脂粉, 倒入 100mL 液体培养基中,在121℃的条件下高压灭菌 ,时间20min,冷却至50℃左右,加入氨苄青霉素/卡那霉素使溶液的最终浓度为 100µg/mL,浇制平板。
IPTG:在8mL水中加入2g IPTG,使其溶解,用去离子水使溶液的体积到 10mL,用0.22um 一次性滤除菌。分装成 1mL 小份,在-20℃的条件下保存。
10%过硫酸铵: 称过硫酸铵1g,倒入10mL去离子水后使其融化,在4℃的条件下保存。
5×SDS-PAGE Loading Buffer:1M Tris-Hcl(PH6.8)1.25mL,0.5g SDS,25mg BPB,25mL甘油,加去离子水定容至5mL,分装后保存于4℃。
考马斯亮蓝染色液:称取1 g考马斯亮蓝R-250,置于1 L烧杯中。量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。加入100 ml的冰醋酸,搅拌均匀。加入650 ml的去离子水,搅拌均匀。用滤纸除去颗粒物质后,室温保存。
考马斯亮蓝脱色液:量取醋酸溶液100 ml,乙醇溶液50 ml共同倒入1 L烧杯中,加入去离子水到1L混匀后使用(边加边混匀)。
50×TAE Buffer:称取242g Tris,37.2g Na2EDTA•2H2O下列试剂于1L烧杯,加入800mL去离子水,充分搅拌溶解,加入57.1ml的醋酸,充分混匀。使用时稀释50倍。
1.1.5 动物免疫实验材料
8-12周龄的健康SPF小鼠 20只,雌雄各半;H9N2亚型的灭活疫苗;注射器若干只;ELISA板;包被液(PH6.3的碳酸盐缓冲液);PBST;底物缓冲液;3% H2O2;显色剂;终止液;MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、无菌针头过滤器、细胞计数板、台盼兰、无菌操作台,CO2培养箱,酶标仪,-20℃冰箱。 新分离H9N2亚型禽流感HA、NA基因的测序分析及其免疫学实验研究(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_25033.html