纤维素酶产生真菌分离纯化与鉴定(2)

纤文素酶（Cellulase）为一种含有多个组分的复合型酶类，它能够催化纤文素分解，使之分解成为寡糖或多糖[3]，并最终形成葡萄糖供真菌利用。自然界中很多真菌都能够产生纤文素酶。据有关文献资料记载，纤文素酶的种类非常多，而且来源不同的纤文素酶的组分及其占比都有着很大的不同[4]。该酶在人类的生产生活当中扮演着十分重要的角色，比如说：在乙醇发酵方面，可作为酒曲微生物发酵乙醇的原料；在动物饲料生产加工工业中，一般饲料中含有丰富的纤文素，利用纤文素酶处理饲料，可促进家禽的吸收消化。当然，在造纸业、轻工业（如纺织工业）等行业中纤文素酶也得到广泛的应用[5]。
总之，纤文素酶应用非常广泛，已经牢固的与人们生活的方方面面结合在一起。而针对我国秸秆生产数量庞大的情况，培育出具有高纤文素酶活力的菌株并进行生物燃料乙醇制造，是我们现在急需认真对待的事情。
1 材料与方法
1.1实验设备
酶标仪（美谷分子仪器有限公司）；
    恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；
高速离心机（赛默飞世尔科技公司）；
    干式恒温器（杭州奥盛仪器有限公司）；
    倒置式生物显微镜（荧光）（Motic AE31）；
    凝胶成像系统（杭州朗基科学仪器有限公司）；
    MP21001电子天平（上海横平科学仪器有限公司）；
    电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；
    PCR扩增仪（杭州BIOER技术公司）
    超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；量筒；烧杯；容量瓶；锥形瓶；塑料锥形瓶；移液管；恒温水浴锅；制冰机；电磁炉；搪瓷缸；微波炉；20μL、200μL和1000μL型号的移液枪；接种针；酒精灯；铝箔纸；环氧乙烷灭菌的塑料培养皿；玻璃培养皿；96孔板；摇床；2mL离心管；玻璃棒；冰箱；冻存管；铁锅；75%酒精棉球；电泳仪；剪刀；镊子；计时器；标签纸；记号笔；粉碎机等
1.2 实验试剂和药品
1.2.1 试剂
3，5—二硝基水杨酸（DNS）。配制方法：先在500mL蒸馏水中准确加入91 g酒石酸钾钠溶并充分搅拌溶解。然后在上述溶液中按照顺序分别加入3.15 g DNS，20 g NaOH，该过程要持续加热、搅拌才能使之充分溶解，接着再往溶液中加入2.5 g重蒸酚， 2.5 g无水Na2SO3，同样不断地加热、搅拌使之充分溶解，最后自然冷却，并定容至1000mL，将之贮放在棕色试剂瓶当中（避光处理），放置7天之后才能使用。
pH4.6的 0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲液。配制方法：取甲溶液5.1 mL: 乙溶液4.9 mL充分混匀即可（甲溶液为0.2 mol/L HAc溶液，配制方法：取12 mL HAc溶液，用蒸馏水稀释至1L；乙溶液为0.2 mol/L NaAc溶液,配制方法：取27.22 g NaAc•3 H2O，将之溶于1L蒸馏水中即可）。
1% 羧甲基纤文素钠（CMC-Na）溶液。配制方法：准确称取1 g CMC-Na，之后将之加入到100 mL的HAc-NaNc缓冲液中，因为羧甲基纤文素钠具有难溶性质，因此要水浴加热并使之使溶解。待冷却后定容至100 mL。
1 mg/mL标准葡萄糖溶液。配制方法：准确称取0.5 g葡萄糖，并加入蒸馏水使之溶解，最后准确定容至100 mL。
1.2.2 药品
琼脂条、羧甲基纤文素钠（CMC-Na）、磷酸氢二钾（K2HPO4）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸铵（（NH4）2SO4）、七水合硫酸镁（MgSO4•7H2O）、乙酸（CH3COOH）、次氯酸钠（NaClO）、SDS、氯化苄、乙醇、氯仿、异丙醇以上试剂购自国药集团化学试剂有限公司；刚果红购自上海试剂三厂；三水合乙酸钠（CH3COONa•3H2O）购自徐州试剂二厂；葡萄糖（C6H12O6）购自天津市大茂化学试剂厂；氯化钠（NaCl）购自上海苏懿化学试剂有限公司。纤维素酶产生真菌分离纯化与鉴定(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_32255.html