1材料与方法
1.1网上数据库
棉花ESTs数据库Tigr(http://plantta.jcvi.org/);
NCBI (National Center for Biotechnology Information,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/);
北京大学棉花转录因子数据库数据库(http://planttfdb.cbi.pku.edu.cn/)。
EXPASy:http:Ilwww.11s.expasy.ch(蛋白质数据库);
http :www.cbs.dtu.dk/ services/SignalP/ (信号肽预测);
http:www.ch.embnet.org/software/tepre d -form .html(跨膜结构预测 );
http :www.cbs.dm.dldservices(糖基化位预测 );
http://wolfpsort.seq.cbrc.jp(S[ E 细胞定位预测 );
http://www.cbs.dtu.dk/services/ProtFun预测MMS21编码蛋白的功能。
1.2实验方法
根据拟南芥等植物中已知MMS21核酸核苷酸和蛋白质氨基酸序列,通过生物信息学技术比对得亚洲棉MMS21基因的同源序列。用ProtParam对蛋白质进行基本特性分析;采用ProtScale在线软件,对基因所编码的氨基酸序列的疏水性/亲水性进行预测;利用SOPMA软件对蛋白质二级结构的组成形式进行分析;用TMHMM-2.0预测蛋白的跨膜结构域;在Expasy中利用SignaIP4.1 Server软件在线分析GaMMS21蛋白的信号肽;用NCBI的CDD对氨基酸序列进行蛋白质保守区分析;用PSORT进行亚细胞定位分析。
2结果
2.1亚洲棉MMS21基因的电子克隆结果
2.1.1亚洲棉基因组数据库获得同源序列1个>GaMMS21
以拟南芥AtMMS21为关键词在NCBI的Nucleotide中检索得到拟南芥的AtMMS21核苷酸序列和蛋白质序列,根据同源基因中存在保守序列的特性,用拟南芥AtMMS21基因序列为信息探针,对NCBI中EST数据库棉花(Gossypium hirstum)进行Tblastx同源性检索,没有找到合适的资源。接着利用BLAST软件,将拟南芥的AtMMS21核苷酸序列在亚洲棉基因组数据库获得一个同源序列>GaMMS21。用此序列再次在亚洲棉ESTs库中对比获的2个ESTs序列。并利用CAP3软件进行拼接,获得1条新生序列。
2.1.2亚洲棉ESTs数据库获得同源序列并进行拼接
用此序列再次在亚洲棉ESTs库中对比获的2个ESTs序列。并利用CAP3软进行拼接,获得1条新生序列
>GaMMS21
ATGGCGTCGACGTCGGCATCTCGGTCTGATGGCGTTTCTTCCAGAATCAGACGCGCGGCTTCCAATCTTAACTCTGACAATCAATTGCTTGTATCCGATATAAGGAAAGCTTTGAATTTGATGAAGGACATCGCTGTAGACTTGGAGAGAGATAATCAATCTGACATGGTGAAGCAGCTAGAAAATGCTGTTGCTGAGCTGGTAGAAGCTCATGAAAACTGTCTACATTATTCATCAGCAATTCATTCTGTTGCAGAGGCATACCGACCAGGGCCTGAGTTAACTGATTTTAAGAAGTTGCTTGACACCGAGTTTGAAAAAGTCAAAGCTGGTTCATCTTCACATCCACAGAATCATCCACTGATGCATCAGTTCCAGCAAGCTGTCTGGAACGTTCATCATGCTGGACAACCAATGCCAGGTGAAGAGCAGGAGGATATTATTATGACCAGTACAGAGAGCAGTATTAAGAATCTTAAATGTCCATTGACTGGAAAGCATATTACTGAACTAACAGAACCAGTTCGCAGCATGGACTGCAAGCACATTTACGAAAAGAATGCTATCCTGATCTACATAAAATCCCATCATAACAATGCCAAATGCCCTGAATCAGCTTGCCCTAAGATGGTGCATGCAAAAAGAGTTATTTGCGATCCATTGTTACTCGTTGAGATAGAGGAGCAACGCACATTGAGTAGACAGACTGCTAGAACTGATGTGGTAGAAGATTTCACAGAAATGGAGCCTCATGATGAAGATAGTACGTGA
>GaMMS21Pro
MASTSASRSDGVSSRIRRAASNLNSDNQLLVSDIRKALNLMKDIAVDLERDNQSDMVKQLENAVAELVEAHENCLHYSSAIHSVAEAYRPGPELTDFKKLLDTEFEKVKAGSSSHPQNHPLMHQFQQAVWNVHHAGQPMPGEEQEDIIMTSTESSIKNLKCPLTGKHITELTEPVRSMDCKHIYEKNAILIYIKSHHNNAKCPESACPKMVHAKRVICDPLLLVEIEEQRTLSRQTARTDVVEDFTEMEPHDEDST 亚洲棉MMS21基因电子克隆和生物信息学分析(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_39603.html