2.3.    实验方法
2.3.1.    工艺流程   GC-MS                     ↑
            缓冲液  预热←酶液           接种     萃取
              ↓     ↓                     ↓       ↑
烟丝→预处理→预热→酶解→灭活→酶解液→灭菌→发酵→成品
                          ↓
                         抽滤→滤液→测还原糖含量
2.3.2.    实验内容及步骤
2.3.2.1.    烟丝粉碎对比实验
提供的原料为烟丝，为了研究原料粉碎与否对酶解效果的影响，故将原料粉碎与不粉碎进行对比试验：取10g烟丝粉碎，分别准确称量1.000g烟粉于100mL三角瓶中，分别加pH4.0缓冲液10mL，加入0.04%纤文素酶（质量分数），未粉碎的烟丝也分别准确称量1.000g于100mL三角瓶中，分别加pH4.0缓冲液10mL，加0.04%纤文素酶（质量分数），同时于50℃水浴中分别酶解作用0.5、1.0、1.5、2.0h，3组平行。
2.3.2.2.    纤文素酶单因素实验
（1）    温度单因素
根据表2.1所列的温度单因素，在其它四个因素：pH值4.0、料液比1:10、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行温度单因素实验。精确称取样品1.000g，加入8mL缓冲液，并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液，酶液和样品置于对应温度的恒温水浴锅内预热30min后，取2mL酶液加入样品后，置于对应温度的恒温震荡水浴锅，计时酶解1.0h，3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
（2）    pH值单因素
根据表2.1所列的pH值单因素，在其它四个因素：温度50℃、料液比1:10、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行pH值单因素实验。精确称取样品1.000g，分别加入pH值为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0缓冲液8mL，并用对应pH值的缓冲液配制0.02%的纤文素酶液，酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后，取2mL酶液加入样品后，置于50℃的恒温震荡水浴锅，计时酶解1.0h，每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
（3）    料液比单因素
根据表2.1所列的料液比单因素，在其它四个因素：温度50℃、pH值4.0、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行料液比单因素实验。精确称取样品1.000g，分别加入3mL、8mL、13mL、18mL、23mL、28mL缓冲液，并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液，酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后，取2mL酶液加入样品后，置于50℃的恒温震荡水浴锅，计时酶解1.0h，每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
（4）    加酶量单因素
根据表2.1所列的加酶量单因素，在其它四个因素：温度50℃、pH值4.0、料液比1:10、酶解时间1.0h的条件下进行加酶量单因素实验。精确称取样品1.000g，分别加入10mL、9mL、8mL、7mL、6mL、5mL缓冲液，并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液，酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后，分别取酶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL加入样品后，置于50℃的恒温震荡水浴锅，计时酶解1.0h，每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。 生物法制备天然烟用香料+文献综述(6):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_4429.html