1.1国内外研究现状

2材料和方法

2.1采样

  2013年7月份、9月份，于天目山地区的低海拔、中低海拔及高海拔地区进行3次野外采样调查。主要采样路径是从禅源寺经太子庵、一里亭、三里亭、五里亭、七里亭、老殿而达仙人顶的登山大道；另一条采样路径是从禅院寺经浮玉山庄、忠烈寺最后到达红庙的公路山道。共采集苔藓样本241份，其中有效作为后期苔藓黄酮实验材料60份。

2.2材料处理

野外采样样本通过剪除、筛选到达初步分离纯化的目的，再对初步分离纯化的苔藓样本进行清洗、二次分离及纯化，并将其进行烘干、保存。最后得到绿色无其他杂质的苔藓样本，用以黄酮提取、抗氧化实验以及抑制乙酰胆碱酯酶活性的测定。并在显微镜和解剖镜下对所采样的所有原始样本进行图像摄取，通过参考相关资料及对照标本进行苔藓样品的种类鉴定，最终确定了39种苔藓样品。

2.3材料与仪器

苔藓植物样品均由杭州师范大学吴玉环教授鉴定，存放于HTC；蒸馏水（单蒸水和双蒸水）；乙醇（A.R）；乙酰胆碱酯酶（AchE，EC 3.1.1.7，SiIGMA 公司）；醋酸-ß -萘醋、醋酸-ɑ-萘酯、Fast Blue B Salt（购于SIGMA公司）；紫外-可见分光光度计（购自上海欣茂仪器有限公司）；移液器，电子天平，恒温水浴锅（购自上海欣茂仪器有限公司）；硅胶G板（青岛海洋化学试剂公司）；超声波发生器（频率20kHz）。

2.4总黄酮提取液的制备

2.4.1）取采集之后清理干净的苔藓样本置于75℃的烘箱内烘干12h，烘干后粉碎，用电子天平准确称取苔藓样本粉末1g于100mL锥形瓶；

2.4.2）在1g实验材料中加入25mlL60%乙醇、25mL单蒸水，再在50℃恒温水浴锅内水浴2h；

2.4.3）水浴过的溶液超声提取20min，并将提取过的溶液抽滤，收集含有黄酮的滤液；

2.4.4）在滤渣中加入25mlL60%乙醇，再在50℃恒温水浴锅内水浴2h，重复3的实验步骤，最后将前后两次所得到的滤液合并，弃滤渣；

2.4.5）减压蒸馏回收乙醇至滤液仅剩5-7 mL为止，放置于100 mL容量瓶中，后用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。