摘要以温莪术内生真菌EZG0807为出发菌株，利用超导磁体模拟空间微重力、高磁场环境对其进行诱变，通过肉眼观察和AFLP分子标记法分别从表型和基因型方面进行分析，初步探索模拟空间诱变机理。观察PDA平板上的菌落，发现菌株EZG0807诱变前后形态上发生了变化；AFLP分析结果显示，在引物对E+AAG/M+CTC和E+AAG/M+CAT扩增下，诱变株M7212约400bp及600bp处有条带缺失。以上结果说明菌株EZG0807在超导磁体作用下确实发生了突变，这为后续高产菌株的筛选奠定了基础。8474
关键词 内生真菌 AFLP 模拟空间诱变
毕业设计说明书（论文）外文摘要
Title AFLP fingerprinting as a tool to study the gene of endophytic fungus EGZ0807 mutant——M7212
Abstract
A superconducting magnet simulates micro-gravity and high magnetic field environment that induce mutation of endophytic fungus EZG0807 ,as starting strain, and then morphological features are observed by naked eyes and genetically studied by AFLP molecular marker method.
Observation of PDA cultures where the fungi are cultivated concludes that strain EZG0807 mutatants display morphological differences; AFLP analysis results ,furthermore,suggest that mutation strains lost bands at about 400bp and 600bp through amplification with E+AAG/M+CTC and E+AAG/M+CAT primers .
The above results demonstrate that strain EZG0807 in superconducting magnet effect does occur mutation, which laid the foundation for the follow-up screening of high yield mutant strain.
Keywords Endophytic Fungi AFLP Simulated Space Mutation
目 次
1 引言 1
1.1 内生真菌的研究概况 1
1.2 空间诱变的应用现状及其发展前景 2
1.3 AFLP分子标记概述 2
2 实验材料 4
2.1 实验材料 4
2.2 培养基 4
2.3 溶液配制 4
2.4 主要试剂 4
2.5 主要仪器及设备 5
3 实验方法及步骤 6
3.1 DNA的提取 6
3.2 DNA的酶切 6
3.3 DNA片段和接头的连接 7
3.4 AFLP预扩增反应 7
3.5 AFLP选择性扩增反应 8
3.6 扩增产物的凝胶分析 8
4 实验结果分析 8
4.1 出发菌株与突变株的形态比较 8
4.2 AFLP分析 9
5. 讨论 10
5.1 DNA提取方案确定及结果分析 10
5.2 酶切及连接应注意的问题 12
5.3 预扩增 14
5.4 选择性扩增 14
5.5 电泳过程中常见问题 14
结 论 16
致 谢 17
参考文献 18
1 引言
自1898年首次从黑麦草(Lolium temulentum L.)种子中分离出内生真菌到现在，对内生真菌进行研究已经有l00多年，但直到20世纪80年代才受到广泛的关注。美国科学家Stierle[1]等人于1993年首次从短叶红豆衫的韧皮部分离到内生真菌安德氏紫杉霉(Taxomyces andreanae)，它能够产生紫杉醇。自此在全球掀起了一股研究内生真菌及其所产活性物质的浪潮。药用植物内生真菌代谢产物的多样性和新颖性，将为利用其进行工业发酵，生产新型活性化合物开辟新的途径[2]。
1.1 内生真菌的研究概况
内生真菌指的是那些在生活史中的某一阶段生活在植物组织内，但并不会导致病害症状的真菌，这包括那些在生活史中的某一阶段营表面生的腐生菌，以及一些对宿主暂时没有伤害的潜伏病原菌及菌根菌[3]。经过长期寄生在植物组织内，内生真菌与宿主植物建立起了共生或半共生的关系，因此能够采用组织学方法或严格的表面消毒从植株中分离得到内生真菌，还能够通过从植株中扩增得到真菌DNA 的方法以对内生真菌的内生性进行证实。近年来的研究证实，大多数分离得到的内生真菌可以产生和宿主植物相同或相似活性物质，其运行机制还有待进一步的研究，但是大多数人认为原因是内生真菌与植物之间产生了基因交流。 AFLP分子标记研究内生真菌EGZ0807突变株基因:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_6857.html