2 材料与方法

2.1 材料

阳性质粒DNA (含有NOS终止子），待测样品为水稻颗粒由老师提供。

2.2 试剂与耗材

DNA抽提试剂盒、定性PCR用Taq酶、dNTP、MgCl2、定量PCR用2x GoldStar TapMan Mixture(with ROX)、电泳用DNA ladder maker均由康为世纪公司提供。PCR Buffer由Thermo公司提供。PCR Buffer由Thermo公司提供。定性及定量PCR引物、探针均由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

2.3 仪器设备

PCR扩增仪、电泳槽、实时荧光PCR扩增仪和电泳仪等电泳装置、凝胶成像系统。

2.4 方法

2.4.1 DNA的提取与纯化

操作步骤

1）将水稻颗粒使用美的搅拌机（MJ-BL25B2）粉碎成粉末状，称取 0. 2 g粉末装入液氮预冷的2mL离心管中，加入400μl Buffer GF14μlRNaseA(100mg/ml)，涡旋振荡1分钟，使其充分裂解。

2）65℃孵育10分钟，期间涡旋混匀2~3次。

3）加入130μl Buffer GF2，混匀，冰上孵育5分钟。

4）将所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中，14,000rpm离心2分钟，收集滤液。