甲苯、苯磷酸二钠、醋酸钠、冰醋酸、柠檬酸、氢氧化钾、铁氰化钾、4-氨基安替毗琳、苯酚等常规试剂均为国产分析纯试剂。

2.2.3  溶液配制

    基质溶液:称量0.675克苯磷酸二钠(C6H5PO4Na2·2H2O)，并加入适当的蒸馏水将其溶解，再将溶解后的溶液用蒸馏水稀释到100ml,此时1ml溶液中含有25mg酚；

    醋酸盐缓冲液(pH5.0)：称量8g醋酸钠，并向其中加入3ml冰醋酸，然后加入蒸馏水稀释到50ml；

    柠檬酸盐缓冲液(pH7.0)：分别称量出9.2g柠檬酸和7.4g氢氧化钾，再将它们分别溶解到蒸馏水中。再将溶解后溶液混合，最后用1mol/LNaOH将pH调至7.0后，用水稀释到50ml；

    硼酸盐缓冲液(pH9.0与pH10.0)：称量0.31g硼酸,再向其中加入50ml氯化钾（0.1mol/L）溶液使其溶解，再用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节它们的pH值；

    2.5%的铁氰化钾溶液：取1g铁氰化钾加入到38.8mL蒸馏水水中；来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

    0.5%的4-氨基安替毗琳溶液：取1g4-氨基安替毗琳加入到197mL蒸馏水中；

酚的标准溶液：(1)原液：将苯酚溶液溶解，取1克苯酚，并用蒸馏水中定容到1升，等待溶液在暗色中稳定。(2)工作液：取5毫升原液，并用蒸馏水稀释到1升，此时1毫升溶液中含有0.05毫克酚。分别1，2，3，4，5，6，7毫升工作液加入到100毫升容量瓶中并显色定容（分别相当于0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30毫克酚)，待到颜色稳定后，比色绘制酚的标准曲线。

2.3  实验方法

2.3.1  测定步骤

     取3克风干的土样于50mL容量瓶中，分别向三角瓶中滴入4~10滴甲苯。并密封容量瓶，静置15分钟后，向容量瓶中分别加入5mL苯磷酸二钠溶液，以及5mL相应的缓冲溶液(碱性磷酸酶加入pHl 0的硼酸缓冲液；中性磷酸酶加入pH7.0的柠檬酸缓冲液；酸性磷酸酶加入pH5.0的醋酸缓冲液)。仔细摇动容量瓶后，将反应物放置于37°C恒温箱内培养24小时。然后用蒸馏水定容至刻度，此时可以看到容量瓶内的甲苯是上浮在上面的，然后摇匀过滤。为了得到反应混合物中酚的含量，准备12只l00毫升容量瓶，吸取1毫升滤液放入容量瓶中，再分别向容量瓶中加入5毫升硼酸缓冲液(pH9.0)，再加入2.5%的铁氰化钾3毫升和0.5%的4-氨基安替毗琳3毫升，摇动，溶液呈粉红色，然后加水定容。直到颜色褪色稳定（约20至30分钟），在紫外分光光度法在570 nm测定水溶液中苯酚的波长。最后用相应的波长在用酚制备的标准曲线查出所对应的供试滤液中酚的含量。

    对照试验：用5毫升水代替基质。按照上述步骤测得酚的含量。