2。 质粒载体材料来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

pCAMBIA2300载体来自本实验中心。

图1。 用于克隆构建的植物双元载体pCAMBIA2300

3。 分子生物学试剂

SacI-HF、BamHI、StuI限制性核酸内切酶购于NEW ENGLISH BIOLABS；QIAquick Gel Extraction Kit购于QIAGEN；T4 DNA polymerase购于TARAKA；NaCl购自上海生工；Trydtone（胰蛋白胨）、Yeast Extract（酵母提取物）购于OXOID；Agar B购于生工；2x EsTaq MasterMix购于康为世纪；琼脂糖购于BIOWEST；DNA Marker购于BIOMED；High Pure PCR Product Purification Kit；质粒抽提QIAprep Spin Miniprep Kit购于QIAGEN。

4。 pCAMBIA2300-CymMV FL侵染性克隆技术路线图

将CymMV全长分段差入双元表达载体pCAMBIA2300，构建pCAMBIA2300-CymMV FL侵染性克隆（图2），主要步骤：

1）RT-PCR扩增SacI5’-BamH片段（5’端添加SacI酶切位点）和BamH-3’StuI片段（3’端添加StuI酶切位点）；

2）SacI、BamHI双酶切，将SacI5’-BamH片段插入到pCAMBIA2300载体中，获得重组质粒pCAMBIA2300-Cy5’-BamH；

3）BamHI、StuI双酶切，将BamH-3’StuI片段插入到中间载体pCAMBIA2300-Cy5’-BamH中，获得重组表达载体pCAMBIA2300-CymMV FL。