体型小，饲养方法简单。⑤添加药物试剂可直接注入水环境中，无需体内注射[ ]。⑥斑马文献综述

鱼基因组与人类的相似度高达87%[ ]，而在神经中枢系统、内脏器官等分子水平上有85％的同源性[ ]。所以非常适用于构建人类疾病模型[ ]。

1.3斑马鱼疾病模型的应用

    通常使用正向遗传法和反向遗传法来建立疾病模型。反向遗传法是指从基因出发，研究斑马鱼与人类疾病相关基因的同源基因，通过诱变该基因来研究其突变体表型与人类疾病症状的相似性。正向遗传法则始于表型出发，通过非特异性诱变得到大量突变体，研究出现特定表型的突变基因，从序列、蛋白产物及其功能方面来分析该基因。同时找出人类与之对应的基因，以此来发现人类与疾病相关的基因或者与疾病相对应的基因缺陷。因此，斑马鱼在医学上被应用于许多人类重大疾病模型中，如癌症、肌肉萎缩症、神经系统疾病、心脏疾病、先天性缺陷疾病、眼科疾病、造血系统疾病、免疫疾病莫性感和感染疾病模型等。

    由于斑马鱼的胚胎及幼鱼体积小，可用微孔培养板培养，用药简单而样品用量少，且其疾病模型是一种活体研究体系，因此被广泛用于药物筛选和毒理学研究。斑马鱼的受精卵或者鱼苗能够便利地从培养介质中吸收亲水或者亲脂的物质这一特性，也使其在检测中药活性方面具有优势。

    利用组织或细胞被特异性标记的转基因斑马鱼，用于筛选出可能对其组织器官发育产生

影响的外源性物质，已成为当今热门的研究方向。最新的研究表明，绿色荧光蛋白(Green

Fluorescent Protein, GFP)能够很好地标记多巴胺能神经元[ ]。DAT:EGFP 转基因斑马鱼可以作为动物活体模型，能更好地了解多巴胺能神经元发育机制、帕金森病的病理机制以及筛选具有治疗潜力的化合物。斑马鱼已经越来越被广泛应用于人类疾病相关的基因及其功能的研究，以及人类重大疾病模型的构建。而且斑马鱼作为一个整体生物水平和高通量的筛选平台，非常适合用于中枢神经系统疾病药物的开发研究。

由于小鼠等大部分哺乳动物胚胎均为体内发育，因而在研究中难以实时对内耳或其他器官的发育状况进行观察研究，从而局限了研究结果的应用性。相对的，对于斑马鱼而言，由于其基因与人类基因的相似度达到87%，这意味着在其身上所做的研究结果能与小鼠一样在多数情况下也适用于人体，加上其特有的体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明，能大规模繁育等特点[ ]。能满足研究者大量筛选的需求，能在较短时间内获得大量的实验数据从而缩短实验周期，提高效率，胚胎体外发育、透明及早期发育的各个阶段均可利用相关手段被观察。与此同时，结合以小鼠为模型的研究结果将极大的提高相关结论的可信度与说服力。

1.4基因Lrrk2与Rsad2

    LRRK2基因在帕金森病（PD）模型中起着重要的作用，但其生物功能，在很大程度上是未知的。在建立斑马鱼Lrrk2突变系的基础上，我们通过RNA-seq技术手段，检测野生型与Lrrk2突变型斑马鱼，对比发现Lrrk2突变基因下游大约上百个基因（C1qa、TNFRSF14、TLR2、CASP4、Rsad2等）发生改变。Rsad2基因又名viperin（radical S-adenosyl methionine domain containing 2）[ ]，在动物细胞线粒体、细胞核、高尔基体中都有发现，研究表明Rsad2基因主要表达于人类大脑的神经元及神经胶质中。其主要是刺激干扰素基因，是帕金森病理模型Lrrk2突变系研究中不可或缺的一部分。另外，研究发现Rsad2基因编码蛋白与先天性免疫也相关，Rsad2表达蛋白具有生物催化活性，机体Rsad2基因的缺失将导致机体对病毒免疫力下降。此外，Rsad2基因作为干扰素刺激基因，可在动物早期妊娠阶段做为胎儿产前诊断。我们通过RNA-seq技术手段检测模式生物斑马鱼Lrrk2突变体中找到与人类同源Rsad2基因，在斑马鱼研究中，我们通过整体胚胎原位杂交技术手段，以此来研究Rsad2基因在斑马鱼Lrrk2突变型与野生型之间的差异化表达。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com 斑马鱼Lrrk2突变体中差异化表达基因Rsad2的原位杂交分析(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_84163.html