2。3。4）将两次滤液合并，收集在50 mL的离心管中，弃滤渣，记录所得滤液的总体积V。

2。4 芦丁标准曲线的制作

2。4。1）芦丁标准液的制备：准确称取120℃干燥恒重的芦丁(>98%)20 mg，加入95%乙醇溶解，定容至100 mL，摇匀得到浓度为0。2 mg/mL的标准液；

2。4。2）芦丁标准曲线的制作：准确吸取芦丁标准液 0、1、2、3、4、5 mL分别置于l0 mL试管中，加水至5 mL，再向各试管中分别加入5% NaNO2溶液0。3 mL，摇匀，静置6min，加入5% Al(NO3)3溶液0。3 mL，摇匀，静置6min，再加入4% NaOH溶液4。4 mL，立即摇匀，静置12 min。于510nm波长处测定吸光度，绘制以浓度为横轴，吸光度值为纵轴的芦丁标准曲线，进行线性回归，得到A、B及回归方程，相关系数。

2。5 地钱雌托及配子体中总黄酮含量的测定

准确吸取样品液2 ml于10 ml试管中，重复2。4。2）中的步骤。用1cm比色皿盛装样品液，以第一管溶液作为空白参比液，测定510 nm波长处的吸光值。根据回归方程求出地钱雌托及配子体中的总黄酮含量（mg/g）。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

2。6 DPPH（二苯基三硝基苯肼）自由基清除活性的测定试验

2。6。1) DPPH溶液的配制：准确称取39。4 mg DPPH（避光保存），溶解于500 ml无水乙醇中；

2。6。2) 样品测定：分别吸取一定梯度的不同体积的地钱雌托与配子体提取液，加乙醇定容至1mL，再加入1mL DPPH溶液，混匀，静置 30min。用1cm比色皿，以未加样的DPPH溶液加乙醇作为对照，于517nm波长处测定吸光度。实验重复三次取平均值。根据下式计算出不同提取液体积时DPPH自由基清除率，并绘制出以提取液体积为横轴，DPPH自由基清除率为纵轴的关系曲线。