孟加拉眼镜蛇的某些器官可用于医药用途，例如蛇胆能清肺凉肝，行气化痰，祛风除湿，清肝明目，平肝息风，解毒；用治肺热咳嗽、痰喘、百日咳、惊痫、目赤昏糊、痔疮红肿、皮肤热毒、痤疮；带骨肉：祛风除湿，通经活络，止痛；用治风湿痹痛、中风瘫痪、半身不遂、小儿麻痹；蛇蜕：祛风定惊，解毒退翳，消肿杀虫；用治小儿惊风、抽搐痉挛、翳障、喉痹、疗肿、皮肤瘙痒；蛇毒：活血，强烈镇痛；用治三叉神经痛、坐骨神经痛、肋间神经痛、关节痛、晚期癌肿痛、麻风、神经痛、小儿麻痹后遗症及椎体外神经麻痹。蛇毒是由蛇的毒液腺分泌出的一种天然毒蛋白,化学成分非常复杂,含有多种蛋白质、多肽、酶类和其他非蛋白类小分子物质,具有较好的生物学活性，是人类研究最多、利用最多的动物毒素。目前蛇毒中研究比较广泛的蛇毒组分是心脏毒素、神经毒素、神经生长因子及抗凝和促凝血毒素等。本文研究以孟加拉眼镜蛇为材料，检测其对特异性底物的水解作用及对小白鼠致死毒性和肌肉毒性。

1 材料与方法

1。1  实验材料

实验材料取自大学实验动物中心的小白鼠和已从孟加拉眼镜蛇中分离的蛇毒。

1。2  研究方法及措施

1。2。1 致死毒性

用雄性ICR小白鼠（约20 g）测定蛇毒半数致死量（LD 50）。四组ICR小白鼠腹腔内注射不同量的蛇毒溶解100μL，对照组只接受等体积生理盐水。记录24小时后动物的死亡情况，用Spearman–寇氏法计算LD 50。

1。2。2 肌肉毒性

四只雄性ICR小白鼠（约20 g）在右大腿肌肉注射，10μ克蛇毒溶解在25μL生理盐水。对照组仅给予25μmg/L。3小时后，小白鼠出血和血浆肌酸激酶（CK）活性用生化试剂盒测定。在美国的肌酸激酶的活性表达。

1。2。3 蛋白水解活性

我们用酪蛋白作为底物来评价蛋白水解活性。在37°C环境下，毒液（40μ克）与0。5毫升底物溶液孵育（0。2米三–HCl，pH值8。5，含2%酪蛋白）2小时。反应中加入0。6毫升的0。44 M TCA 37°C 30分钟结束。然后，将混合物离心15分钟，取12000克（0。8毫升）上清加入2 ml 0。4 M Na 2 CO 3和0。4毫升的福林试剂（原试剂/水= 2 / 1），并在660纳米处读取吸光度。我们使用L-酪氨酸为标准，和酶活性单位定义为nmol L -酪氨酸释放/分钟/ mg粗毒。对金属蛋白酶水解酪蛋白的作用测定，毒液孵育40毫米EDTA 30分钟前加入底物溶液。

1。2。4 5′-核苷酸酶的活

据昏沈睡眠气等5′-核苷酸酶活性的测定。毒液样本（1。6μG）加入90μL底物溶液（50毫米的Tris–HCl，pH值7。4，含10 mM氯化镁2，氯化钠50毫米，10毫米和10毫米5 KCl′AMP），和incubatedat37°cfor30分钟。然后，0。42%钼酸铵、1 M硫酸和10%抗坏血酸酸被添加到停止反应。吸光度记录在660纳米。我们用KH 2 PO 4为标准，确定酶活性作为释放分钟/ mg粗毒的无机磷浓度。文献综述

1。2。5氨基酸氧化酶活性

我们使用L-亮氨酸为底物对L-氨基酸氧化酶活性据富山等人。在37°C环境下，防毒液（2μG）加入90μL底物溶液（50毫米的Tris–HCl，pH值8，含0。25毫米L-亮氨酸，2毫米的邻苯二胺和0。81 U / ML辣根过氧化物酶）反映1小时。然后，反应结束了50μ升2米2，所以4，吸光度记录在490纳米。H 2 O 2作为标准；酶活性被定义为H 2 O 2 nmol退化/分钟/ mg粗毒。

1。2。6磷脂酶2活性

检测根据安图内斯等人为活动性磷脂酶2。用不同量的毒液样本轻轻混合底物系统（0。1 M NaCl，10毫米7毫米的CaCl 2、Triton X-100、0。35%大豆卵磷脂和98。8毫米酚红，pH 7。6）。吸光度在558 nm连续记录2。5分钟，在室温下，酶活性被定义为0。3元/分钟/ mg粗毒的吸光度变化。  孟加拉眼镜蛇毒酶活性与致死毒性检测(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_86133.html