拟南芥核糖体大亚基RPL7Ae的生物学功能初探(3)

此次实验采用病毒学诱导基因沉默技术（VIGS），在本氏烟草系统中研究拟南芥基因的功能[18]。病毒诱导的基因沉默（virus induced gene silencing，VIGS）是指携带目标基因片段的病毒侵染植物后，可诱导植物内源基因沉默、引起表型变化，进而根据表型变异研究目标基因的功能[21]。VIGS是根据植物对RNA病毒防御机制发展起来的一种技术，其内在的分子基础可能是转录后基因沉默(post-transcript gene silence)。与传统的基因功能分析方法相比，VIGS能够在侵染植物当代对目标基因进行沉默和功能分析[19]；可以避免植物转化；克服功能重复；可以在不同遗传背景下起作用，对基因功能分析更透彻[20]。因此，VIGS一经建立，即被视为研究植物基因功能的强有力工具，得到了深入的研究和广泛应用，已用于烟草、番茄等植物的抗病反应、生长发育以及代谢调控的功能基因研究。在植物基因组研究进入功能基因组的时代，建立快速鉴定目标序列或基因功能的技术平台已刻不容缓[21]。植物抗病性是植物的一种属性，植物对病原体的抗性可以通过诱导产生。病毒诱导基因沉默是植物抗病的可能机制，同时为功能基因组学的研究探索出一条有效的研究方法。文献综述

此次研究的是AT2G47610，AT2G47610基因编码的蛋白质是核糖体蛋白的成员，它参与翻译，并且参与核糖体的结构组成。该蛋白包含的结构域：核糖体蛋白L7A (InterPro:IPR001921)核糖体蛋白L7Ae / (InterPro:IPR018492)核糖体蛋白L7Ae / L30e / S12e。最匹配的拟南芥同源蛋白是核糖体蛋白L7Ae / L30e / S12e / Gadd45家族蛋白(TAIR AT3G62870。1)。AT2G47610的基因长度是744bp。基因序列如图：

1 材料与方法

1。1 实验材料以及设备

实验材料：实验材料取自种植的拟南芥拟南芥（Arabidopsis thaliana, ecotype Columbia）Col-0以及本氏烟草(Nicotiana benthamiana）进行实验操作。

实验相关分子生物学试剂：DNA聚合酶：LA taq（TAKARA公司产品），dNTP（TAKARA公司产品），引物(Invitrogen公司订购)，10×LA taq buffer（TAKARA公司产品），限制性内切酶（NEB公司产品），RNA提取试剂盒（QIAGEN公司产品），凝胶回收试剂盒（QIAGEN公司产品），m7G（5'）ppp（5'）G RNA Cap Structure Analog（购自NEB公司，货号#S1404S），T7 RNA Polymerase（购自NEB公司，货号M0251S）。Ribonucleotide Solution Set (ATP, UTP, GTP, CTP均为100 mM)（均购自NEB公司，货号N0450S）。T4 DNA ligase（TAKARA公司产品），RNA酶抑制剂 (RNasin，Promega公司产品)。

实验室相关化学试剂：异丙醇（国药集团），无水乙醇（国药集团），氯仿（国药集团），氯化钠（国药集团），琼脂糖（Biowest Agarose，西班牙），蛋白胨（typtone，上海生工），酵母提取物（Yeast Extract Powder，上海生工），Agar B（上海生工），Ampicillin（Sigma公司产品），NaOH（国药集团），HCl（国药集团），酚:氯仿:异戊醇=25:24:1（solarbio公司产品），NaAc（醋酸钠，sigma公司产品），DuRed（北京泛博生物化学有限公司）。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

质粒载体：pMD19-T（TAKARA公司产品），PVX病毒侵染性克隆载体。

菌株：大肠杆菌感受态细胞DH5α。

实验室设备：温度梯度PCR仪（BioRad公司），凝胶成像仪（BioRad公司），Nikon单反相机（D5300），金属浴（Eppendorf公司），MiliQ超纯水系统（Milipore公司），高压灭菌锅（BioRad公司），低温离心机（Eppendorf公司），超低温冰箱（Thermo Fisher Scientific公司），超净台（苏州苏净），生物安全柜（Thermo Fisher Scientific）， NanoDrop微量分光光度计（Thermo Fisher Scientific），控温摇床（Thermo Fisher Scientific），细菌培养箱（Thermo Fisher Scientific），烘箱（Thermo Fisher Scientific），核酸蛋白质电泳系统(BioRad)，电子天平（METTLER TOLEDO）。拟南芥核糖体大亚基RPL7Ae的生物学功能初探(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_87934.html