氧化应激下酵母蛋白的表达模式分析

摘要：安琪酵母为材料，用酵母完全培养基（YPD培养基）进行培养。通过划线培养，挑选出单菌落。经过镜检之后，选取活性高的菌株进行扩大培养。对培养至对数期的酵母分别给予1 mmol/L Cu+ 和25 μmol/L Cd+ 处理，分别处理2 h、3 h、4 h和9 h、10 h、11 h。最后，使酵母破壁并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳）对处理过的酵母所产生的蛋白进行检测。
关键词：酵母培养；氧化处理； SDS-PAGE电泳10299
Analysis of yeast protein expression patterns under oxidative stress
Abstract: The experiment use Angel yeast as the material, which was incubated by yeast culture medium (YPD medium). After that, a single yeast colony was sorted out by streak cultivation. Then, a high activity yeast strains was selected under microscope to process secondary yeast propagator. Treat the logarithmic phase yeast using Cu(1 mmol/L) and Cd(25 μmol/L) respectively, processing respectively 2 h, 3 h, 4 h and 9 h, 10 h, 11 h. Finally, break the yeast wall and detect protein changes in the processed yeast by polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE electrophoresis）.
Key words: Yeast culture; Oxidation treatment; SDS-PAGE electrophoresis
目    录
摘要   1
关键词   1
引言   1
1. 材料和方法   2
1.1 实验材料   2
1.2 试验方法   4
1.3酵母菌的氧化刺激   6
1.4酵母菌的破壁   6
1.5 SDS-PAGE电泳检测蛋白   7
2. 结果与分析   7
2.1 初筛结果   7
2.2 复筛结果   8
2.3 酵母菌的鉴定   9
2.4 酵母菌氧化刺激的结果   9
2.5 酵母菌的破壁效果   10
2.6 SDS-PAGE检测蛋白质结果   11
3. 结论   11
4. 展望   12
参考文献   12
致谢   14
氧化应激下酵母蛋白表达模式的分析引言
酵母是一种单细胞真核生物，作为一种模式生物，对它的研究已经比较透彻。酵母具有16条染色体，通过对酿酒酵母完整基因组测序，发现在12068 kb 的全基因组序列中有5885 个编码专一性蛋白质的开放阅读框。这意着在酵母基因组中平均每隔 2 kb 就存在一个编码蛋白质的基因 ,即整个基因组有 72 %的核苷酸顺序由开放阅读框组成[1]。
   铜是有机体必需的一种金属元素，少量的铜对生物体有积极的作用。作为超氧化物歧化酶（SOD）的重要辅基，铜对清除氧自由基，保护细胞有重要作用；铜还是文持呼吸的细胞色素氧化酶的重要辅基[2]。但是高浓度的铜，与硫醇基团结合，或者催化 Fenton 反应[3]，产生•OH[4]，引起细胞伤害[5]。
   镉是一种重金属元素，可用于制造合金、充电电池等方面。但是，镉对植物和动物都有一定程度的危害。镉可以影响植物细胞结构、生理功能、光合作用等[6]。镉对人体健康的危害表现在对肺、肾、免疫系统等方面[7]。研究表明,镉诱导细胞氧化损伤是镉毒性的主要原因[8]。但与自氧化或Fenton反应直接产生自由基的过渡金属(如Fe和Cu)不同，Cd通过降低细胞的抗氧化能力间接地诱导细胞氧化损伤,其作用方式包括以下3种： 1)与细胞质中的谷胱甘肽(GSH)和金属硫蛋白(MT)的巯基结合，消耗细胞内的抗氧化物； 2)置换抗氧化酶的活性金属离子，抑制其活性，而且如果置换出Fe离子，会进一步诱导羟自由基的产生；3)与线粒体膜上呼吸链复合物结合，抑制电子传递并诱导氧自由基的产生[9]。氧化应激下酵母蛋白的表达模式分析:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_9317.html