（13）100:3 洗脱液

1 L 二氯甲烷加入 30 mL 甲醇充分混匀。

（14）100:5 洗脱液

1 L 二氯甲烷加入 50 mL 甲醇充分混匀。

（15）100:10 洗脱液

1 L 二氯甲烷加入 100 mL 甲醇充分混匀。

2。3 主要仪器

超净工作台

722 型可见光分光光度计 电子天平 SW-CJ-IF 01080010

YP5001 苏州安泰空气技术有限公司 上海凤凰光学科仪有限公司 上海海康电子仪器厂

控温摇床 DHZ-052D 上海博彩生物科技有限公司论文网

台式离心机 TGL-16G 上海安亭科学仪器厂

上海博讯实业有限公司医疗设备

人工气候箱 BIC-300

厂

高压蒸汽灭菌锅 YX-280B 上海三申医疗器械有限公司

多功能电磁炉 C19-SH1982 广东美的生活电器制造有限公司

电热鼓风干燥箱 DHG 9240A 上海一恒科学仪器有限公司

旋转蒸发仪 N-1100V 东京理化

层析柱 BZ24/29 泰州市沪可玻璃制品有限公司

三用紫外分析仪 ZF-Ι-型 上海顾村电光仪器厂

冰箱 BCD-206YH 型 青岛海尔股份有限公司

恒温水浴锅 HH 江苏金坛市中大仪器厂

2。4 培养基

麦芽固体培养基：称取麦芽 6。5 g，加水煮沸 20 min，补充水至 300 mL，加入蔗

糖 6。5 g、琼脂 1。5 g，121 ℃灭菌 20 min，冷却后倒入平板，待其凝固可使用。

发酵培养基（麦芽液体培养基）：称取麦芽 20 g，加水煮沸 30 min，补充水至 1

L，加入蔗糖 20 g、蛋白胨 3 g，121 ℃灭菌 20 min，备用。

2。5 菌株的活化及发酵

活化：无菌操作下将菌种接种到麦芽固体培养基中，保鲜膜封闭培养皿的边缘， 在 28 ℃下恒温培养 3-5 d，备用。

发酵：将活化过的菌种接种到麦芽液体培养基中，在 28 ℃，120 r/min 条件下振 荡发酵 12 d。

2。6 菌丝体色素的提取

用四层纱布过滤，所得的菌丝体在研钵中用少量液氮充分研磨。研磨的菌丝体用 70 % 的乙醇为提取剂，在超声波提取器中提取 2 h 后，离心 10 min （5000 rpm）， 取上清。上清液为橘红色澄清液。提取液用旋转蒸发仪浓缩后获得固体物，固体物用 蒸馏水配置成 10 mg/mL 的母液并保存在冰箱中备用。取适量母液，用蒸馏水稀释到 0。25 mg/mL、0。5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL 等 5 个浓度的水溶液备用。

2。7 色素对本土植物的化感作用

2。7。1 色素对种子发芽的影响

（1）种子的培育

选取油麦菜、小麦和芝麻作为实验对象。用 5 %次氯酸钠溶液对种子进行表面

消毒 30 min，蒸馏水反复洗净。将处理好的种子均匀置于铺有用蒸馏水润湿的双层滤

纸的培养皿上，芝麻和油麦菜每只培养皿放 50 粒种子，小麦每只培养皿放 30 粒种子。 每个浓度设三个重复，蒸馏水处理为对照。培养皿加盖在白天/黑夜温度 28 ℃/25 ℃、 湿度 75 %、光/暗周期 12 h/12 h 的恒温培养箱中进行培育。期间每天向培养皿中加入 一株加拿大一枝黄花内生菌菌丝体色素的成分鉴定及其化感作用研究(7):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_93912.html