多节孢属Nodulisporium真菌属于子囊菌门Ascomycota 粪壳菌纲Sordariomycetes 炭角菌目Xylariales 炭角菌科Xylariaceae[10]。迄今已报道多节孢属真菌次生代谢产物70余个，主要有生物碱、聚酮、萜及甾体等[11]，其代谢产物结构新颖多样。

此外本次实验应用了一项之前在此类试验中没有应用的技术，大孔树脂在提纯分离的应用。大孔吸附树脂(macroprous adsorption resin,MAR)是近几十年发展起来的一种具有多孔立体结构、人工合成的有机高分子聚合物。它是最近几年高分子领域里新发展起来的一种多孔性树脂，由苯乙烯和二乙烯苯等单体，在甲苯等有机溶剂存在下，通过悬浮共聚法制得的鱼籽样的小圆球。广泛用于废水处理、药剂分离和提纯，用作化学反应催化剂的载体，气体色谱分析及凝胶渗透色谱分子量分级柱的填料。由于其特殊的理化性质和吸附性能,已被广泛应用于化学、医药、环保和食品等领域。

基于此，本课题拟采用先进的天然有机化学、农药学以及色谱和波谱学的相关技术与方法，深入研究多节孢属真菌中的天然活性分子。为快速发现新活性物质，本项目拟以抗菌活性测试和1H-NMR监测为分离导向，结合多种现代分离纯化及结构测定方法，分离和确定新化合物，并以抗植物病原菌活性作为评价系统，探讨Nodulosporium sp。 A21中新成分的结构和功能的关系。利用该模式快速发掘化学结构新颖、生物活性显著的天然产物，为创制拥有我国自主知识产权的新型高效、低毒、选择性好的绿色农药提供先导化合物。

1材料与方法 

1。1  材料 

1。1。1 菌株来源

南京农业大学植物保护学院天然药物化学实验室保存的银杏内生真菌菌种库

1。1。2 培养基文献综述

    PDA：葡萄糖20g、马铃薯200g、琼脂20g、水1000mL。

PD：葡萄糖20g、马铃薯200g、水1000mL。

1。1。3 主要仪器设备

高压蒸汽灭菌锅 TOMY SX-500 日本

摇床 QYC-2102C 宁波江南仪器厂

恒温培养箱 SPX-128 宁波江南仪器厂

旋转蒸发仪 EYELA N-1100 日本

HPLC Aglient 1200 美国

超净工作台 AIRTECH SW-CJ-1F     江苏苏净集团

1。2  实验方法

1。2。1内生真菌发酵液（FB）制备及发酵液乙酸乙酯粗提物（CE）的制备

用0。5 cm打孔器将经活化的内生真菌制成菌饼，接种于液体培养基中（150mL PD/250mL三角瓶，10菌饼/瓶），25±1°C、150 rpm摇瓶黑暗培养5 d，将发酵液分别均匀倒入90个锥形瓶中，每瓶加入0。4L。发酵三天后每瓶加入12g大红树脂，接着置于摇床上发酵12d，至有大量菌丝球出现，经100目尼龙网过滤得菌体和发酵液（FB）。发酵液用乙酸乙酯萃取3次，浓缩蒸干，得到菌株发酵液乙酸乙酯粗提物浸膏（CE），4°C保存。

1。2。2菌株Nodulispium sp。 A21不同有机溶剂提取物的制备

发酵液分别用不同有机溶剂萃取：石油醚:乙酸乙酯（100:8）过硅胶柱，获得萃取物后静置结晶；二氯甲烷过硅胶柱后没有得到有效的结晶；二氯甲烷：甲醇（100:1）过ODS后，分别得到两种不同结晶;二氯甲烷：甲醇（100:2）过ODS后得到结晶物和混合膏状物质，此膏状物分别过二氯甲烷：甲醇（100:16）和（100:32），（100:32）的萃取物过HPLC后得到纯净结晶物;二氯甲烷：甲醇（100:4）过ODS后得到纯净结晶体。流程图如下：来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766- 银杏内生真菌Nodulisporiumsp.A21的新抗菌化合物研究(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_96688.html