试验中，加酶量为2.5%时，水解度理论上应该高于2.0%，低于3.0%，但是由于试验中不均一的损失或甲醛滴定中的误差，导致水解度偏低。因此综上述，复合蛋白酶添加量选择2.0%。
（2）复合蛋白酶酶解时间的选择
首先先添加猪胰脂肪酶，条件为温度35℃，pH7，底物浓度分别为1:6，酶添加量为1.5%的情况下酶解3h。随后，为了确定复合蛋白酶的最适添加量，在温度55℃，pH为7.5，底物浓度为1:8，酶添加量2.0%的情况下分别酶解1、2、3、4、5h，然后继续加入风蛋白酶（条件为温度50℃，酶解时间2h），观察不同复合蛋白酶酶解时间对酶水解效果的影响，结果见图3.14（origin作图）。
 图3.14 酶解时间对复合蛋白酶的水解度和固形物含量的影响
Fig. 3.14 The impact of the hydrolysis time on the degree of hydrolysis and solids content
图3.14描述了水解度随复合蛋白酶酶解时间的变化趋势，在1-3h之间水解度有明显上升趋势，之后随着时间增加水解度只略有上升。原因在于在酶添加量一定的情况下，酶解之初，底物浓度较高，作用时间不够充分，酶解速率随着作用时间的延长而提高，水解度随之上升。但当底物蛋白逐渐被酶解转化之后，产物对底物有抑制作用，酶解速率下降。同时，温度促使酶蛋白变性是随时间而累加的，随着时间的延长，部分酶可能失活也是导致酶解后程速率下降的一个原因。因此复合蛋白酶酶解时间选择3h。
3.3 游离氨基酸含量分析
表3.1 牛骨酶解液中游离氨基酸含量
Table 3.1 The content of free amino acids in bovine bone hydrolysate
氨基酸名称    样品1（mg/ml）    样品2（mg/ml）    样品3（mg/ml）    样品4（mg/ml）    样品5（mg/ml）
天冬氨酸    0.03428    0.03647    0.03731    0.03469    0.03404
谷氨酸    0.005010    0.1035    0.001429    0.006750    0.001277
丝氨酸    0.003908    0.004184    0.004826    0.005253    0.005107
组氨酸    0.02961    0.02708    0.03082    0.03084    0.03191
甘氨酸    0.1554    0.1629    0.1986    0.2345    0.2396
苏氨酸    0.02333    0.02322    0.01932    0.02236    0.02140
精氨酸    0.1820    0.2374    0.3429    0.7442    0.5048
丙氨酸    0.1267    0.1347    0.1516    0.1668    0.1619
酪氨酸    0.1352    0.1211    0.1231    0.1212    0.1208
半胱氨酸    0.01746    0.01608    0.01462    0.01538    0.01491
缬氨酸    0.04014    0.03989    0.04174    0.04150    0.04093
蛋氨酸    0.04280    0.03975    0.04050    0.03890    0.04031
苯丙氨酸    0.1282    0.1173    0.1172    0.1116    0.1149
异亮氨酸    0.04637    0.04596    0.04721    0.04713    0.04805
亮氨酸    0.1552    0.1473    0.1497    0.1446    0.1445 牛骨蛋白酶解工艺研究(9):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_2441.html