沙门氏菌（salmonella）最早是在1885年时由美国细菌学家Salmon从霍乱猪身上分离的猪霍乱沙门氏菌（salmonella cholerasuis）。它属于无芽孢、无荚膜的革兰氏阴性短杆菌，长有菌毛、可吸附在细胞表面，在37℃左右时生长最为迅速。沙门氏菌主要来源于人和动物的粪便，它对外部环境具有较强的耐受性，在土壤、水中、肉类中都有可能存活数周甚至数月。沙门氏菌的血清型种类众多，全世界范围已经发现的一共有2523个血清类型，中国大约有300个。这些血清型都能引起食源性疾病，常见的有：鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、猪伤寒沙门氏菌（Salmonella typhisuis）、德尔卑沙门氏菌（Salmonella Derby）、肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteritidis）、都柏林沙门氏菌（Salmonella Dublin）等。

随着人类生活水平的不断提高，肉、蛋、奶类食品以其丰富的营养成分在人类的膳食结构中扮演着不可或缺的角色。但是养殖条件的限制、食品生产加工过程的繁琐和人们的卫生安全意识薄弱等因素，致使世界范围内的食品安全问题层出不穷。之前屡屡报道的恶性食物中毒事件一次又一次拉响食品卫生安全的警报。因此食品卫生安全越来越受到各个国家政府和民众的重视。王燕梅[13-14]等调查研究表明：2006至2009年期间，江苏省食源性疾病检出率最高的是肉类食品，而沙门氏菌为肉类食品中检出率最高的细菌。因此如何有效的防控食源性沙门氏菌的侵染、传播显得尤为紧迫了。

为了降低沙门氏菌病的发病率和传染率，必须要控制和减少沙门氏菌在人与环境、人与动物以及动物与环境之间的传播。因此进一步了解和掌握日常食品中沙门氏菌的污染状况是极其有必要的。本实验就是从徐州市不同的农贸市场采集样品猪肉，从中分离和鉴定沙门氏菌的数量和种类以明确本市新鲜猪肉中沙门氏菌的污染程度。利用抗生素敏感性实验进一步探明本地区新鲜猪肉中沙门氏菌的耐药特点，从而为兽医用药甚至临床用药提供一定的参考。

1材料和方法

1.1实验材料

    选择徐州市不同农贸市场，随机选取正在售卖的生鲜猪肉作为样品。

1.2试剂和仪器

    缓冲蛋白胨水（BPW）培养基干粉、Rappaport-Vassiliadis(MSRV) Medium Semisolid Modification、新生霉素、XLT4 Agar Base、XLT4 Agar Supplement 均购自Becton Dickinson公司，Agar购自Sangon Biotech公司。细菌基因组DNA提取试剂盒、2×TaqMaster Mix均购自北京TIANGEN公司。LB 培养基干粉、即用型Taq酶PCR试剂盒、薄型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒均购自上海Generay Biotech.公司。药敏纸片购自英国OXOID公司。沙门氏菌属40种诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司，其他微生物实验室常规试剂均为国产或进口分析纯级试剂。源`自*优尔?文.论/文`网[www.youerw.com

 ABI GeneAmp®9700型PCR扩增仪购自Thermo Fisher公司。电力恒温培养箱、Gelx1520型凝胶成像仪、S10-2型磁力搅拌器、DYY-7C型电泳仪、恒温摇床、小型离心机等均为实验室常用仪器。

1.3方法

1.3.1样品采集

    从徐州市不同农贸市场分别采集新鲜猪肉样品20g左右装入无菌袋中带回实验室。

1.3.2细菌的分离与纯化

采样提前一天配制好BPW增菌液并灭菌（121℃、20min）备用，每份样品用无菌镊子夹入无菌袋后，加入BPW培养液浸没过样品之后用封口机封口（如图1所示），所有装好样品的培养袋放在37℃恒温摇床上培养过夜（150rpm、18h）。轻轻摇动样品培养液，吸取1ml用点触法接种于改良MSRV半固体培养基上，42℃恒温培养16h-18h。用一次性接种环无菌挑取培养基边缘白色细菌，三区划线法接种于XLT4固体培养基上，37℃恒温倒置培养16h-18h。挑取XLT4培养基上的黑色带金属光泽的单菌落重复接种到XLT4固体培养基培养即为纯化一次，也可以进行多次纯化。 市售猪肉中沙门氏菌的分离与鉴定(3):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_54469.html