(8)    按照建立的方法，重复进样；
(9)    通过积分图，处理数据，通过光盘导出数据。
色谱仪2：开机；自检；方法建立；参数设定；检测；数据处理导出。
色谱仪3：同色谱仪2。
 
4结果与讨论
4.1 用HPLC，C18，手性柱分析优尔椒碱
4.1.1 用C18柱分析优尔椒碱
  使用Dikma Technologies  C18 5u 1524.6柱，流动相甲-醇水6:4每升+25mmol硝酸银和2.5ml冰醋酸，流速1ml/min，检测波长280nm ，常温下检测。测定合成优尔椒碱、优尔椒样品、合成优尔椒碱标样和优尔椒样品混合谱图见图1.-图3。
图1 合成优尔椒碱色谱图
(色谱仪2，Dikma Technologies  C18 5u 1524.6柱，甲醇水6:4每升+25mmol硝酸银和2.5ml冰醋酸，流速1ml/min，检测波长280nm ，常温)
图2 优尔椒样品色谱图，色谱条件同图1
图3 合成优尔椒碱标样和优尔椒样品混合进样色谱图，色谱条件同图1
通过对合成优尔椒碱标样和优尔椒样品的检测，得到了与文献[25]中相似的结果，但这种方法使用添加硝酸银流动相会破坏柱子结构，降低了方法的灵敏度，柱子使用一段时间后出峰重复性变差，而且此方法的检测时间过长，尝试使用其它方法分离优尔椒碱。
4.4.2优尔椒样品不同提取液的分析结果
使用C18柱分析优尔椒碱，尝试了甲醇水的多种比例混合检测优尔椒碱标样，并检测了甲醇、乙醇和甲醇四氢呋喃超声浸取的优尔椒样品，在谱图前前部出现响应值较大的重现性很好的峰，与标准品保留时间不一致，怀疑为优尔椒红素，后又尝试使用氢氧化钠溶液浸洗再用有机相萃取的方法脱去优尔椒样品中的油脂，但经进一步检测并未得到重复性结果。
4.4.3 用手性柱分析优尔椒碱
使用CHIRALCEL OD柱，尝试了甲醇-水(9：1,含0.2%三氟乙酸)，甲醇-水（9：1，含0.2%三乙胺），甲醇-水（83：17，正己烷，含0.1%乙腈），正己烷-异丙醇（7：3），正己烷-异丙醇（8：2，含少量三乙胺），正己烷-异丙醇（7：3，含0.1%三乙胺），正己烷-异丙醇（8：2，含0.2%三乙胺），正己烷-异丙醇（9：1，含0.2%三乙胺），正己烷-异丙醇（9：1，含0.4%三乙胺）流动相体系，但并未分离合成优尔椒碱和天然优尔椒碱。
使用CHIRALPAK AD-H  0.4625柱，尝试了正己烷-异丙醇（7：3），正己烷-异丙醇（9：1，含0.2%三氟乙酸），正己烷-异丙醇（9：1，含0.5%三乙胺）流动相体系，无法分离合成优尔椒碱和天然优尔椒碱。
使用两种手性柱的多种流动相体系分析优尔椒碱，难以分离优尔椒碱，谱图重复性差，无法作为分离依据。
4.2 HPLC银离子柱的制备
根据文献查到银离子色谱柱可以分离含有烯键的物质，合成优尔椒碱和天然优尔椒碱的主要区别是相差一个烯键，按照文献[36]的方法自制银离子色谱柱。
对文献方法适当改动,本实验的制备方法为：用1%乙酸铵水溶液以0.5ml/min冲洗柱子一小时，再使用蒸馏水以1ml/min冲洗柱子1小时，在这1小时中将1ml 0.2g/ml现配硝酸银溶液以50ul每分钟的方式完成进样，在最后一针进样结束后20min，改用甲醇以1ml/min冲洗1小时，再用正己烷-乙醇7:3以1ml/min冲洗25min，最后用正己烷以1ml/min冲洗1小时，待用。
4.3 HPLC银离子柱用于优尔椒碱分析
本次试验使用了正己烷-乙腈和正己烷-乙醇两种流动相体系分析优尔椒碱。
4.3.1 正己烷乙腈体系
使用了三种色谱条件分析优尔椒碱：
(1)Waters510，银离子柱2，流动相正己烷（含0.6%乙腈），流速1ml/min，检测波长280nm，柱温室温（15.9℃）；
(2) U3000，银离子柱2，流动相正己烷（含0.2%乙腈），柱温35℃，流速1ml/min，进样量3ul；
(3) U3000，银离子柱2，流动相正己烷（含0.2%乙腈和0.1%1mol/l硝酸），柱温35℃，流速1ml/min，进样量3ul。 调味品中合成辣椒碱的HPLC分析(4):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_8727.html